基因重组技术原理与重组子鉴定策略.pptVIP

第七章重组子选择、筛选和分析

（TheSelection,screeningandanalysisofrebinants）;第一节转基因筛选和选择的方法;1．依据载体选择标识初步筛选转化子

载体DNA分子上通常携带了一定的选择遗传标识基因，可进行转化子或重组子初步筛选。做法是将转化处理后的菌液（涉及对照处理）适量涂布在选择培养基上，在最适生长温度条件下培养一定时间，观察菌落生长情况，即可挑选出转化子。

对于受体细胞而言，通常用LB培养基，在LB培养基中加入适量的某种选择物，即为选择培养基。选择物是由载体DNA分子上携带的选择标识基因所决定。

（1）抗药性筛选法

（2）插入失活筛选法

（3）插入表示筛选法;（1）抗药性筛选

这是利用载体DNA分子上的抗药性筛选标识进行筛选的方法。主要用于重组质粒DNA分子的转化子筛选。重组质粒DNA分子携带特定的抗药性选择标识基因，在含有相应选择药品的选择培养基上正常生长。

①氨苄青霉素（ampicillin，Ap或Amp）:含bla基因的菌体能转译?-丙酰胺酶(?-lactarnase)，可降解Ap。

②氯霉素(chloramphenicol,Cm或Cmp):含cat基因的菌体能转译氯霉素乙酰转酰酶(chloramphenicolacetyltransferase)，使