高通量测序技术原理与应用综述.pdfVIP

什么是高通量？

高通量技术（High-throughputsequencing，HTS）是对传统Sanger（称为一

代技术）性的改变,一次对几十万到几百万条分子进行序列测定,因此在有些文献

中称其为下一代技术(nextgenerationsequencing，NGS)足见其划时代的改变,同时

高通量使得对一个物种的转录组和组进行细致全貌的分析成为可能,所以又被称为深

度(Deepsequencing)。

什么是Sanger法（一代）

Sanger法利用一种聚合酶来延伸结合在待定序列模板上的引物。直到掺入一种链

终止核苷酸为止。每一次序列测定由一套四个单独的反应构成，每个反应含有所有四种脱氧核

苷酸三磷酸(dNTP)，并混入限量的一种不同的双脱氧核苷三磷酸(ddNTP)。由于ddNTP缺

乏延伸所需要的3-OH基团，使延长的寡聚核苷酸选择性地在G、A、T或C处终止。终止点

由反应中相应的双脱氧而定。每一种dN