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ELISA检测抗原抗体实验报告

一、实验材料与仪器

（一）实验材料

抗原与抗体：本次实验选用重组人肿瘤坏死因子-α（TNF-α）作为检测抗原，浓度为1mg/mL；兔抗人TNF-α多克隆抗体作为一抗，工作浓度为1:1000；辣根过氧化物酶（HRP）标记的羊抗兔IgG作为二抗，工作浓度为1:2000。所有生物试剂均购自知名生物科技公司，且在有效期内使用。

包被液与封闭液：包被液采用0.05mol/L碳酸盐缓冲液（pH9.6），用于将抗原固定在酶标板表面；封闭液为5%脱脂奶粉溶液，用磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.4）配制，旨在封闭酶标板上未结合抗原的位点，减少非特异性结合。

洗涤液与底物液：洗涤液为含0.05%吐温-20的PBS（PBST），用于洗去未结合的抗体及其他杂质；底物液采用邻苯二胺（OPD）底物溶液，包含OPD、过氧化氢及柠檬酸-磷酸缓冲液（pH5.0），在HRP催化下可产生黄色产物，用于显色反应。

终止液：2mol/L硫酸溶液，用于终止底物的显色反应，使颜色稳定以便读取吸光度值。

样本与标准品：标准品为重组人TNF-α，用PBS稀释成浓度梯度为0、10、20、40、80、160pg/mL的溶液；待检测样本为3份患者血清样本，采集后于-20℃保存，实验前室温解冻并充分混匀。

（二）实验仪器

酶标仪：型号为ThermoScientificMultiskanFC，具备450n