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禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测方法

1、范围

禽流感病毒通用荧光RT-PCR检测的操作方法，适用于活

禽及其产中禽流感病毒的检测。

2、缩略语

缩略语：

荧光RT-PCR,荧光反转录-聚合酶链反应。

Ct值，每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经

历的循环数。

RNA,核糖核酸。

DEPC,焦碳酸乙二酯。

PBs,磷酸盐缓冲盐水。

Taq酶，TaqDNA聚合酶。

3、原理

禽流感病毒各亚型均属A型流感病毒，根据A型流感病

毒共有基因特定的序列，合成一对特异性引物和一条特异性

的荧光双标记探针。该探针与禽流感病毒特有的共同基因特

异性结合，结合部位位于引物结合区域内。探针的5端和

3端分别标记不同的荧光素，如5端标记FAM荧光素，它

发出的荧光能够被检测仪器接收，称为报告荧光基团用（R表

示），3端一般标记TAMRA荧光素，它在近距离内能吸收

5端报告荧光基团发出的荧光信号，称为淬灭荧光基团用（

Q表示）。