生物药物分析与检验-氨基酸多肽和蛋白质类药品检验.pptVIP

.第二节多肽因子类和蛋白质类药品检验②转移电泳将湿醋酸纤维素（NC)薄膜紧贴凝胶，凝胶与薄膜之间不能有气泡，否则在气泡所在部位的条带将不能转移，在NC膜和凝胶的另一侧放上两层湿滤纸，也不能有气泡，再在两边贴上海绵，最后用塑料网框架夹紧，插入电泳槽，根据凝胶中样品所带电荷的性质，决定有NC膜的一边是靠近正极还是靠近负极一侧。电泳条件取决于凝胶类型、转移装置和蛋白质本身性质等。一般采用低电压和低电流（2mA/cm2以内)。缓冲液中一般含有20％的甲醇或乙醇，其作用主要是保持凝胶的几何形状。.第二节多肽因子类和蛋白质类药品检验③检测或鉴定NC膜借助非共价键吸附蛋白质，经转移后蛋白质条带就固定在NC膜上，完全保留凝胶中的蛋白谱，可直接用考马斯亮蓝、氨基黑10B等染色。如果利用蛋白质生物活性，或用蛋白质生物探针来检测，就要先用1％～3％的牛血清蛋白或血红蛋白，或非离子去垢剂（0.3％吐温-20)等处理NC纸，以封闭NC纸上未吸附蛋白质区域，使其不再能吸附蛋白质。使用非离子去垢剂比较经济，但有可能把NC纸上的某些蛋白质洗掉，同时还要将NC纸反复洗涤以去除变性剂，.第二节多肽因子类和蛋白质类药品检验二、多肽因子类药物的检查1.分子量检查常用还原型SDS法检查分子量，用量约1μg。也可采用凝胶过滤法，例如Sephadecx系列（G-75，