69　选择性必修3　第九单元　微专题7　PCR技术与电泳相关问题 (1).docxVIP

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微专题7PCR技术与电泳相关问题

一、PCR技术及应用

1．PCR循环图示及规律

2．PCR中的数量关系

循环次数

1

2

3

n

DNA

分子数

2

4

8

2n

含引物

1(或2)

的DNA

分子数

1

3

7

2n－1

同时含

引物1、

2的DNA

分子数

0＝21－2

2＝22－2

6＝23－2

2n－2

共消耗

的引物

数量

2＝21+1

－2

6＝22+1

－2

14＝23+1

－2

2n+1－2

3．重叠延伸PCR技术

重叠延伸PCR技术是一项重要的基因定点突变技术，其主要设计思路是用具有互补配对片段的引物(图中的引物2和3，突起处代表与模板链不能互补的突变位点)，分别进行PCR，获得有重叠链的两种DNA片段，再在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸获得想要的目的基因。水蛭素是一种蛋白质，可用于预防和治疗血栓。某科研团队运用重叠延伸PCR技术在水蛭素基因中的特定位点引入特定突变，使水蛭素第47位的天冬酰胺(密码子为AAC、AAU)替换为赖氨酸(密码子为AAA、AAG)，从而提高水蛭素的抗凝血活性。原理如图。

4．反向PCR技术

反向PCR技术是根据DNA片段中间的已知序列设计引物，扩增已知序列两侧的未知序列扩增思路：先从未知序列的两侧把DNA切成片段，然后通过DNA连接酶将