紫外分光光度法测定蓝莓提取液中花青素含量酸 .docVIP

紫外分光光度法（pH示差法）测定蓝莓提取液中花青素含量

一、目的要求

1．了解紫外-可见分光光度计的基本结构和工作原理，熟悉其操作流程。

2．掌握紫外分光光度法（pH示差法）测定花青素含量的基本原理和操作方法。

3．学习朗伯-比尔定律在定量分析中的实际应用。

实验原理

蓝莓提取液中的颜色主要由花色苷提供。花色苷的呈色物质主要包括单体花青素、聚合色素和褐色降解物。受花青素结构特性的影响，当溶液pH为1.0时，花青素以黄烊盐阳离子形式存在，在520nm附近有最大吸收；而当溶液pH为4.5时，花青素转变为无色查尔酮形式，在520nm处几乎无吸收。与此同时，聚合色素和褐色降解物的吸收特性几乎不随pH变化而改变。不同pH条件下花青素的主要结构形式变化如图1所示。

图2不同pH下花青素的主要结构形式变化

因而可以用示差法计算溶液中花青素浓度C（Osawa,1982）。根据朗伯比尔定律，计算公式如下

其中A表示吸光值，A=(Amax)pH1.0-(Amax)pH4.5(Amax,由全波长扫描得到)

MW表示分子质量，

DF表示稀释倍数

ε表示摩尔消光系数,

1为比色皿光程1cm

当ε未知或者样品成分未知，则将矢车菊素-3-葡萄糖苷作为标准物，此时MW=449.2Da，ε=26900

A=(Amax)pH1.0-(Amax)pH4.5(Amax由全波长扫描得到)

三、仪器与