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实验动物

汉坦病毒检测方法

Laboratoryanimal—Methodforexaminationof

Hantavirus(HV)

1范围

本标准规定了汉坦病毒(HV)的检测方法、试剂等。

本标准适用于小鼠、大鼠HV的检测。

2引用标准

下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。本标准出版时，所示版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨使用下列标准最新版本的可能性。

相关标准实验动物酶联免疫吸附试验

相关标准实验动物免疫荧光试验

3原理

根据免疫学原理，采用HV抗原检测小鼠、大鼠血清中HV抗体。

4主要试剂和器材

4.1试剂

4.1.1ELISA抗原

4.1.1.1特异性抗原

在生物安全柜内，用Hantaan型或Seoul型毒株感染的E6细胞，当特异性荧光达+++时，即可收获培养物。冻融三次或超声波处理后，低速离心去除细胞碎片，上清液再经超速离心浓缩后制成ELISA抗原。

4.1.1.2正常抗原

E6细胞冻融破碎后，经低速离心去除细胞碎片而获得的上清液。

4.1.2抗原片

在生物安全柜内，用Hantaan型或Seoul型毒株感染E6细胞，每2～3d更换维持液，培养7~10d,用IFA法测定细胞内特异性荧光。当荧光达+++时，将细胞用胰酶分散，用PBS