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mRNA疫苗生产工艺指南（2025版）

第一章总则与工艺设计原则

mRNA疫苗作为新一代生物制药领域的核心突破，其生产工艺的复杂性、严谨性和无菌要求均达到了前所未有的高度。2025版生产工艺指南旨在为mRNA疫苗从研发到商业化规模生产提供全生命周期、可落地的技术规范与操作框架。本指南覆盖从质粒DNA（pDNA）起始模板制备、体外转录（IVT）、mRNA纯化、脂质纳米颗粒（LNP）包封到无菌灌装的全流程工艺，强调质量源于设计理念在生产过程中的深度贯彻。

工艺设计核心原则包括：一是全流程封闭化与一次性使用技术（SUT）的全面应用，以降低交叉污染风险并提高生产柔性；二是工艺过程分析技术（PAT）的深度集成，实现关键质量属性（CQA）的实时监控；三是工艺强化与连续化生产的引入，特别是在IVT反应与LNP混合环节的连续化工艺探索。生产工艺的放大不得仅依赖线性放大，必须结合流体力学、热力学及混合剪切力的多维建模进行验证。

第二章质粒DNA（pDNA）模板的制备与质控

pDNA作为mRNA合成的起始模板，其序列准确性、拓扑结构及纯度直接决定后续IVT反应的效率与mRNA终产物的质量。商业化生产中，pDNA通常采用大肠杆菌发酵工艺制备。

2.1菌种库构建与发酵工艺

生产用工程菌需建立经过严格鉴定的主代种子库（MSB）和工作种子库（WSB）。发酵工艺通常采用分批补料策略在发酵罐中进行。补料策略