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细胞培养无菌操作技术规范

1操作前无菌准备

1.1操作环境与洁净系统预处理

细胞培养操作需在万级洁净度的细胞培养房中进行，局部操作区需为符合百级洁净要求的生物安全柜或超净工作台。操作开始前35-40min开启超净工作台/生物安全柜的紫外消毒灯，紫外线波长为254nm，功率30W，照射距离不超过1.2m，保证操作区所有表面充分照射，避免消毒死角。照射完成后关闭紫外灯，提前15-20min开启送风系统，维持风速0.3-0.5m/s，平衡气流后才可开始操作。细胞培养箱需提前预热至37℃，维持CO?浓度5%±0.1%、饱和湿度，每日记录温度、CO?浓度参数，偏差超过±0.5℃或±0.2%需及时校准。培养箱内储水盘需每3天更换一次无菌超纯水，添加0.02%叠氮钠或0.1%硫酸铜抑制真菌滋生，禁止使用未灭菌的自来水。超净工作台外部、细胞培养间地面、墙面需在操作前10min用0.1%新洁尔灭溶液擦拭，细胞培养间需保持正压，压差不低于10Pa，避免非洁净空气流入。新启用或停用超过7天的细胞培养间/超净台，需提前进行全面熏蒸消毒，无菌检测合格才可投入使用。

1.2耗材与试剂的无菌预处理

一次性耗材：商品化预灭菌一次性细胞培养瓶、移液管、枪头、离心管等，需检查外包装完整性，无破损、无潮湿、在保质期内才可使用，外包装打开前需用75%医用乙醇对表面整体消毒后才可移入超净台。未预灭菌的一次性耗材需采用