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细菌药敏试验操作规范

1试验前准备

1.1人员资质要求

操作人员须经临床微生物检验专业培训，考核合格后方可独立操作，需熟悉各类病原菌药敏试验的特殊要求、质量控制规范、生物安全操作要求，及时掌握美国临床和实验室标准协会（CLSI）及国内卫生健康行业最新标准更新内容，能够准确识别异常结果并完成复核。

1.2试剂与耗材要求

1.2.1培养基

（1）普通需氧菌药敏试验统一采用水解酪蛋白（Mueller-Hinton，MH）琼脂，配制后要求pH值稳定在7.2~7.4，pH值偏差超过0.2会导致抑菌圈直径偏差超过2mm，酸性环境会使氨基糖苷类、大环内酯类抑菌圈缩小，碱性环境会使青霉素类、头孢菌素类抑菌圈缩小。高压灭菌后冷却至45℃~50℃倾注平皿：90mm内径平皿倾注25~30ml，最终琼脂厚度为4±0.5mm；150mm内径平皿倾注60~70ml，厚度保持一致。琼脂过厚会导致抑菌圈偏小，过薄会导致抑菌圈偏大，均会影响结果准确性。

（2）配制完成的MH琼脂平板密封后2℃~8℃避光储存，未开封有效期不超过3个月，开封后有效期不超过1个月，使用前需检查是否存在污染、琼脂干裂、抗生素交叉污染等情况，异常平板丢弃不用。

（3）特殊病原菌药敏试验需调整培养基：嗜血杆菌属药敏试验采用添加辅酶I、血红素和酵母浸出粉的嗜血杆菌测试培养基（HTM）；链球菌属药敏试验采用添加5%~10%脱纤维羊血的MH琼