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基因工程的主要操作技术及原理基因工程的主要操作技术及原理第1页

DNA提取总DNA提取1、植物总DNA提取2、动物总DNA提取3、大肠杆菌总DNA提取4.质粒DNA提取基因工程的主要操作技术及原理第2页

总DNA提取DNA应用构建基因组文库:100kbSouthern杂交(包含RFLP)50kbPCR分离基因等50kb基因工程的主要操作技术及原理第3页

因材施提依据不一样研究需要,确保结构对应完整性尽可能排除其它大分子成份污染(蛋白质、多糖及RNA等)确保提取样品中不含对酶有抑制作用有机溶剂及高浓度金属离子在DNA提取过程中应做到基因工程的主要操作技术及原理第4页

1.植物细胞总DNA提取总标准：取材（尽可能新鲜)液氮研磨裂解去蛋白和细胞物浓缩。基因工程的主要操作技术及原理第5页

（1)CTAB法：CTAB(cetyltriethylammoniumbromide)(十六烷基三甲基溴化铵)原理:CTAB是一个阳离子去污剂，可溶解细胞膜并能与核酸形成复合物，该复合物在高盐溶液中(0.7mol/LNaCl)是可溶，当降低溶液盐浓度到0.3mol/LNaCl时，从溶液中沉淀，经过离心就可将其与蛋白，多糖类物质分开，在经过有机溶剂抽提，去除蛋白，多糖，酚类等杂质。最终经过乙醇或异丙醇沉淀DNA。CTAB溶于乙醇或异丙醇进而除去在高离子强度溶液中(0.7m