流感病毒的分离培养专家讲座.pptVIP

一、流感病毒MDCK细胞分离方法（一)生物安全要求H5,H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒MDCK细胞分离试验室生物安全级别：BSL-3。试验操作人员需进行BSL-3防护，详细详见“生物安全个人防护SOP”。H5,H7亚型高致病性禽流感病毒，H2N2亚型流感病毒MDCK细胞分离操作必须在BSL-3级试验室生物安全柜中进行。流感病毒的分离培养专家讲座第1页

其余流感病毒MDCK细胞分离试验室生物安全级别：BSL-2。试验操作人员需进行BSL-2防护，详细详见生物安全个人防护SOP”。其余流感病毒MDCK细胞分离操作必须在BSL-2级试验室生物安全柜中进行。流感病毒的分离培养专家讲座第2页

（二）材料1、75％～90％成片MDCK细胞，选取适当大小细胞培养瓶和细胞培养板来用做病毒分离2、胰酶（牛胰腺起源Ⅷ型）3、HEPES缓冲液，1M母液4、D-MEM培养基，Hanks液5.青、链霉素母液（10000U/mL青霉素G；10000μg/mL硫酸链霉素流感病毒的分离培养专家讲座第3页

6、牛血清白蛋白组分Ⅴ，7.5%溶液7、临床样品0.5mL8、1mL无菌移液管9、10mL无菌移液管10、15mL无菌离心管流感病毒的分离培养专家讲座第4页

（三）试验步骤1.准备病毒生长液（1）细胞维持液准备500mLD-MEM液中加入①青、链霉素母液5mL（终浓度达：10