基因芯片技术在心血管研究中的应用.pptVIP

三、基因芯片制备技术（一)原位合成的芯片基于组合化学的合成原理，它通过一组定位模板来决定基片表面上不同化学单体的偶联位点和次序。在片合成法制备DNA芯片的关键是高空间分辨率的模板定位技术和固相合成化学技术的精巧结合。原位合成方法的工作原理Affymetrix公司研究组首次报道和采用合成高密度基因芯片（二)直接点样法首先按常规方法制备cDNA（或寡核苷酸)探针库，然后通过特殊的针头和微喷头,分别把不同的探针溶液，逐点分配在玻璃、尼龙或者其它固相基底表面上不同位点,并通过物理和化学的结合使探针被固定于芯片的相应位点。1.探针的准备根据实验的目的,选择相应的探针及种类,基因芯片的探针主要有寡核苷酸或cDNA。对于寡核苷酸探针,探针的设计是很关键的一个环节,需要根据研究目的设计相应的探针序列,如SNP分析芯片,必须考虑待检测位点的序列和位置,需要严格控制探针的Tm值。如果用于表达谱的研究,目的基因的寡核苷酸探针设计原则是尽量使探针与其他基因之间没有同源性,即探针的特异性要好。???对于cDNA芯片,需要预先克隆到大量目的基因的cDNA克隆,并经过测序验证。用PCR进行探针的扩增,经过纯化后,即可用于点样。2.玻片的表面修饰对于DNA芯片，点样法所用载体多为玻璃