外源基因的原核表达培训课件.pptVIP

*外源基因的原核表达*四、高效表达目标基因的战略和技术高密度发酵和工程化宿主细胞大肠杆菌高密度发酵是大规模制备重组蛋白质过程中不可缺少的工艺步骤。其目的是在单个菌体对目标基因的表达水平基本不变的前提下，通过单位体积的菌体数量的成倍增加来实现总表达量的提高。目前常用的发酵方式有:恒定培养、流加补料培养、连续培养三种*外源基因的原核表达*构建出产乙酸能力低的工程化宿主菌高密度发酵后期由于菌体的生长密度较高,培养基中的溶氧饱和度往往比较低,氧气的不足导致菌体生长速率降低和乙酸的累积,乙酸的存在对目标基因的高效表达有明显的阻抑作用。这是高密度发酵工艺研究中最迫切需要解决的问题。虽然在发酵过程中可采取通氧气,提高搅拌速度,控制补料速度等措施来控制溶氧饱和度,减少乙酸的产生。但从实际应用上看,这些措施都有一定的滞后效应,难以做到比较精确的控制。因此构建出产乙酸能力低的工程化宿主菌,是从恨本上解决问题的途径之一。*外源基因的原核表达*芽孢杆菌表达系统芽孢杆菌是对人畜无害的革兰氏阳性土壤微生物。细菌细胞壁内不含内毒素,能分泌大量蛋白到胞外,目前已成为一些重要工业酶制剂的生产菌种。*外源基因的原核表达*1.多为非致病性微生物2.培养条件简单，生