16_碱性磷酸酶km值的测定.pptVIP

碱性磷酸酶Km的测定值

【实验目的】■1.了解酶的Km值测定原理和方法■2．掌握碱性磷酸酶（AKP)活性测定的原理和方法

但当底物浓度增大到一定极限时，则反应速度趋于恒定，此最大反应速度Vmax，反应速度与底物浓度之间的关系可用米氏方程来表示，即:【实验原理】■在温度，PH及酶浓度恒定的条件下，酶促反应的初速度随底物浓度（S）增大而增加

其中Km为米氏常数,Vmax为最大反应速度,当V=Vmax/2时,则Km=[s]K的一种方法m是酶的特征常数,测定Km是研究酶V=Vmax?[S]Km+[S]的一种方法V=。

■将米氏方程变形为双倒数方程，以值。■1/V=Km/Vmax?[S]距为／[s]作图,将各点连线,在横轴截/km,据此可算出Km1/Vmax距为l/+v1--

■本实验以碱性磷酸酶为例，用磷酸苯二钠为其底物，生成酚和磷酸，酚在碱性溶液中与4一氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化生成红色醌的衍生物，根据红色的深浅可测出酶活力高低。其反应式如下 -苯酚苯酚+4-氨基安替比林K3Fe(CN)6醌衍生物（红色)::磷酸苯二钠+H2OAKP