大肠杆菌感受态细胞及其制备.pptxVIP

大肠杆菌感受态细胞及其制备高职及本科生物技术课程

课程背景课程目标介绍大肠杆菌感受态细胞概念、制备及应用01课程结构02课程预期成果03应用领域04教学目标

大肠杆菌的生物学特性大肠杆菌概述大肠杆菌概述

感受态细胞感受态细胞的概念感受态细胞是指在一定条件下，细菌细胞壁对溶菌酶的敏感性增强，细胞壁变得较为脆弱，易于被外界物质如DNA分子穿透的状态。这种状态使得细菌能够更容易地吸收外源DNA，是基因工程中常用的方法。01感受态细胞的特点包括：021.细胞壁对溶菌酶的敏感性增强；032.细胞壁变得较为脆弱；043.易于吸收外源DNA。感受态细胞的定义

感受态细胞制备方法概述化学法化学法处理大肠杆菌成感受态，稳定性差适用范围化学法适用于转化子小、转化效率要求不高的实验。电穿孔法电穿孔法使DNA进入细胞，转化效率高适用范围电穿孔法适用于转化子大、转化效率要求高的实验。激光转化法激光转化法使DNA进入细胞，效率低适用范围

化学法利用高渗盐溶液和低温处理使细胞膜通透性增加化学法原理首先用氯化钙溶液处理大肠杆菌，使细胞壁电荷中和，然后加入低温溶液如甘油，最后通过冰浴处理增强细胞膜稳定性化学法步骤01最后用CaCl2溶液处理使细胞壁恢复通透性注意事项02避免使用过热或过冷的溶液，以免细胞受损注意事项03操作过程中需保持无菌环境，防止污染注意事项04严格控制处理时间和温度，确保细胞状态最佳注意事