基因的基本步骤与策略 - 图课件.pptVIP

Cas9核酸酶切割1识别靶点Cas9核酸酶首先识别目标DNA序列,并与之结合。2切割DNA一旦Cas9核酸酶与靶点DNA序列结合,它就会切割两条DNA链,形成双链断裂。3修复机制细胞的DNA修复机制会试图修复断裂的DNA链,但这个过程可能会引入新的突变或插入基因片段。DNA修复机制1非同源末端连接(NHEJ)一种快速但不精确的修复方式,直接将断裂的DNA末端连接起来,可能导致基因序列的丢失或插入。2同源重组(HR)一种更为精确的修复方式,利用完整的DNA模板进行修复,确保基因序列的完整性,但修复速度较慢。基因片段插入1设计引导序列根据目标基因组位置设计与Cas9蛋白结合的引导RNA序列。2合成供体DNA构建包含目标基因片段的供体DNA,供体DNA需与目标基因组序列两端匹配。3导入细胞将Cas9蛋白、引导RNA和供体DNA导入目标细胞,例如通过电穿孔、病毒载体等方式。4同源重组Cas9蛋白切割目标基因组后,供体DNA通过同源重组机制整合到基因组中,实现基因片段的插入。基因片段插入是基因编辑技术中的一种重要方式,它允许科学家将特定的基因片段插入到目标基因组中的特定位置,从而改变基因的功能或表达。基因敲除1目标基因失活通过CRISPR-Cas9系统切割