T―DNA标签技术及其在植物功能基因组研究中的应

维普资讯 第24卷 第6期 青 海 大 学 学 报 (自然 科 学 版 ) V01．24No；6 2006年 l2月 JournalofQing~ University(NatureScience) Dec．20o6 T—DNA标签技术及其在植物 功能基因组研究中的应用 杨永智 (青海大学农林科学院，青海 西宁 810016) 摘要：综述了T—DNA转移和整合机理的研究进展，植物T—DNA标签的种类和特点及其在功 能基因组研究中的应用。 关键词 ：T—DNA；T—DNA标签；植物功能基因组学；突变 中图分类号：Q812 文献标识码：A 文章编号：1006—8996(2006)06—0034—06 T—DNA tagginganditsapplication inplant functionalgenomeresearch YANG Yong--zhi (AcademyofAgriculutreandForestryScience，QinghaiUniversiyt，Xining810016，China) Abstract：ThispaperviewedtheprincipleofT—DNAtransferandintegration，thetypesandthecharac— tersofT—-DNA insertionmutation inplantandtheapplicationofT--DNA taggingtoplantfunctional genomeresearch． Keywords：T—-DNA；T—-DNA tagging；plantfunctionalgenomics；mutant T—DNA标签技术是以农杆菌 (A_grobacterium)介导的转化为基础的一种插入突变研究方法。插入 突变是将某些DNA元件插人到植物基因组中后，相应位点的基因的表达就可能受到抑制，利用插入元 件作为标签，在插入位点处贴了一个标签，使得植物基因组的插入位点容易辨认。根据插入位点的基因 序列与植物表型变异等的相互关系可以从基因组中分离出相应的基因并鉴定其功能。目前，植物中最 常用的插入元件有 T—DNA、转座子、反转录转座子等[，。其中T—DNA法的最大特点是插入后稳定 ， 在获得稳定的表型突变后，可用报告基因为探针利用质粒挽救 ，TAIL—PCR、PCR—Walking等技术在突 变体文库中克隆相应T—DNA插入位点的侧翼序列。若插入的是无启动子的GUS，GFP等报告基因，一 旦T—DNA插入植物启动子附近，可导致外源基因的表达，从而可以在细胞或组织水平上对启动子进行 筛选[3l。 T—DNA的插入主要以单拷贝的形式插入，大大降低了基因沉默的频率，且插入不具有基因位点特 异性，可以建立饱和的T—DNA插入突变库l4J。随着农杆菌介导的水稻转基因技术的不断完善，T— DNA插入技术己成为快速构建插入突变体库的主要手段[5,6J。本文主要对T—DNA转移和整合机理的 研究、水稻T—DNA标签的种类、特点及其在功能基因组研究中的应用作介绍。 1 T—DNA转移和整合机理 T—DNA来自根癌农杆菌(Agrobacteriumtumefaciens)，根癌农杆菌是植物冠缨病的病原菌，其菌体内 有一个能使植物产生肿瘤的质粒(Ti质粒)，Ti质粒上含有一段DNA可以转移到寄主的染色体内，此即 为T—DNA。T—DNA具有植物激素基因及产生特殊衍生物 (opines)的基因，这一段基因插入寄主染色 收稿 日期：2OO6—05—29 作者简介：杨永智(1968_)，男，青海贵德人。副研究员。 维普资讯 第6期 杨永智：T—DNA标签技术及其在植物功能