可溶性氮测定方法.pdf

FNCPSL0075 动物饲料 可溶性氮的测定 稀盐酸中用胃蛋白酶处理法 F_NCP_SL_0075 动物饲料—可溶性氮的测定—稀盐酸中用胃蛋白酶处理法 1 范围 该国际标准规定了在稀盐酸中用胃蛋白酶处理后测定动物饲料可溶性氮含量的方法。 该方法不能区别蛋白氮和非蛋白氮。 注: 用此方法得到的值同体内消化率没有直接关系。 如果从实验结果中除去非蛋白氮，它的含量应该用一个适宜的方法测定。 2 引用标准 下列标准所包含的条文，通过在本标准中引用而构成为本标准的条文。在标准出版时，所示 版本均为有效。所有标准都会被修订，使用本标准的各方应探讨，使用下列标准最新版本的可能 性。 ISO 5983 ：1997 动物饲料中氮含量测定和粗蛋白质含量的计算——K 氏法。 ISO 6498 ：1983 动物饲料试样的制备。 3 原理 样品在胃蛋白酶稀盐酸溶液中于 400 C 培养 48h 。 悬浮液过滤并按照 K 氏方法即可测定滤液的氮含量也可测定滤器上残渣氮含量。 4 试剂 只能使用认可的分析级试剂，蒸馏水或去离子水或至少同等纯度的水。 所有试剂( 除标准材料外) 实际都应该是无氮化合物。 4.1 稀盐酸，c(HCl)=0.075mol/L 。 4.2 胃蛋白酶，活性 2.0U/mg 与附录 A 中给出的定义一致。按附录 A 中规定的方法检查胃蛋白 酶活性。 4.3 胃蛋白酶盐酸溶液，酶活性约 400U/L 。 在 1L 稀盐酸溶液中(4. 1)溶解 0.2g ±0.001g 胃蛋白酶。使用之前立即制备该溶液。 如果胃蛋白酶活性偏离 2.0U/mg ，调节胃蛋白酶质量以便获得一个胃蛋白酶活性为 400U/L 的溶液。 4.4 盐酸，c(HCl)=7.5mol/L (ρ =1.125g/ml) 。 20 5 仪器设备 一般实验室设备，特殊的如下。 0 0 5.1 水浴或培养葙，温度能维持在 40 C ±1 C 。 5.2 K 氏烧瓶，适宜容积。 5.3 滤纸，快速，耐酸。 5.4 蒸馏和滴定装置。 6 采样 6.1 散装产品采样方法 根据堆型和体积大小分区设点，按货堆高度分层采样。 6.1.1 分区设点：在货堆的不同方位选若干个采样区。各区设中心、四角五个点，货堆边缘的点在距边缘 约 50cm 处。 6.1.2 采样：按区设点，先上后下逐点采样，各点采样数量一致。 6.2 散装采样方法 散装或罐车在出口处根据采样量的需要，间隔采样。 6.3 袋装采样方法 6.3.1 采样包数：5 包至 10 包逐包采样；10 包以上选取 10 包采样；5 包以下不采。采样包的选取参照 6.1.2 。 6.3.2 采样：将取样钎槽口朝下，从包的一角水平斜向插向包的对角，然后转动取样钎至槽口朝上取出， 每包采样次数一致。或拆包采取。 6.4 成品出料口采样方法 在出料口采样，每 10 袋或间隔 2min ，取样铲采样。 6.5 样品的缩分 将样品倒在清洁、光滑、平坦的桌面或光面硬纸上，充分混匀后将样品摊成平面正方形，然后以两 条对角线为界分成四个三角形，取出其中两个对角三角形的样品，剩下的样品再按上述方法反复缩分，直 至最后剩下的两个对顶三角形的样品接近平均样品所需的重量为止。 实验室收到的样品的真实性和代表性以及在传送和贮存时不发生损坏是十分重要的。 保存样品时应避免样品发生变质和变化。 7 试样制备 按照 ISO 6498( 即 FNCPSL0067)制备试样。 如果试样脂肪含量超过 10%(m/m) ，按照 ISO 6498 提取脂肪，计算(条款 9) 时要考虑提取的脂 肪含量。 8 操作步骤 8. 1 试料 称取 2g 制备的试样，精确至 0.001g 。 8.2 培养 将试料置于 500ml 容量瓶中并加 50ml 事先加热到 400 C 的胃蛋白酶溶液。振摇以避免结块。 检查悬浮液的 pH 值低于 1.7 。将烧瓶置于 400 C 水浴或培养箱中放 48h 。8h 、24h 和 32h 后振摇。 48h 后加 15ml 盐酸并冷至 200 C 。用水稀释至刻度，振摇并通过滤纸过滤。按 8.3 或 8.4 进行。 8.3 滤液