农杆菌介导热激转录因子8基因转化大豆.pdf

豆科基因组学与遗传学 Douke Jiyinzuxue Yu Yichuanxue 2010, Vol.1, No.5 研究论文 An Article 农杆菌介导热激转录因子 8 基因转化大豆 1 1 1 1 1 1 2 唐晓飞 , 刘丽君 , 高明杰 , 杨喆 , 蒲国峰 , 张雷 , 魏崃 1. 黑龙江省农业科学院大豆研究所, 哈尔滨, 150086 2. 东北农业大学, 哈尔滨, 150030 通讯作者: nkyssbd@126.com; 作者 豆科基因组学与遗传学, 2010 年, 第 1 卷, 第 5 篇 DOI: 10.5376/.2010.01.0005 收稿日期：2010 年 7 月 23 日 接受日期：2010 年 10 月 25 日 发表日期：2010 年 12 月 10 日 本文首次发表在《分子植物育种》印刷版上。现经版权所有人授权，采用《Creative Commons Attribution License》在《豆科基因组学与遗传学》 中文网络版上再次发表与传播。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播。 唐晓飞等, 2009, 农杆菌介导热激转录因子 8 基因转化大豆, 分子植物育种, 7(3): 444-450 (DOI: 10.3969/mpb.007.000444) 摘要 环境胁迫严重影响作物的生长和发育，热激转录因子(heat shock factor 8, HSF)是一类在热应激反应中起重要作用的蛋 白质，主要功能是在热休克基因的表达过程中与相应热激元件结合，启动基因的转录过程，最终促进热休克蛋白(HSP)基因 的表达。本文将热激转录因子 8 (hsf8)基因构建在植物表达载体pCAMBIA3300 中，以大豆子叶节作为受体，通过农杆菌介 导法将hsf8 基因导入品质性状优良的两个高产大豆新品系哈交 5337 和哈交 5489 中，最后获得转基因植株。在开展大豆遗 传转化过程中，探讨了农杆菌介导大豆子叶节转化体系的影响因素，优化了转化条件。在共培养后，采用延迟筛选的方法来 提高选择效率。并确定草胺磷筛选浓度为 3.5 mg/L 。获得转化质粒pCAMBIA3300-HSF8 的转基因植株，其中T1代PCR 阳性 植株 17 株。采用Real-time PCR 的方法对T1代抗性植株进行hsf8 基因的转录水平的相对定量分析，确定 9 株较非转基因植株 哈交 5337 表达量明显提高。有 1 株明显低于哈交 5489 的hsf8 基因表达量。 关键词 大豆; 农杆菌转化; 热激转录因子 8 基因; 耐热性 Agrobacterium-Mediated Transformation of hsf8 into Soybean 1 1 1 1 1 1 2 Tang Xiaofei , Liu Lijun , Gao Mingjie , Yang Zhe , Pu Guofeng , Zhang Lei , Wei Lai 1. Soybean Research Institute, Academy of Agricultural Sciences, Harbin, 150086 2. Northeast Agriculture University, Harbin, 150030 Corresponding author, nkyssbd@126.com; Authors Abstract Abiotic stresses, such as drought, salinity, extreme temperatures, chemical toxicity and oxidative stress are serious threats to agriculture and the natural status of