含硫氨基酸基因植物表达载体的构建及对百脉根

豆科基因组学与遗传学 Douke Jiyinzuxue Yu Yichuanxue 2010, Vol.1, No.4 研究论文 Research Article 含硫氨基酸基因植物表达载体的构建及对百脉根的转化 1 1 1 1 2 关宁 , 王涌鑫 , 李聪 , 苗丽宏 , 张博 1. 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所牧草遗传育种研究室, 北京, 100193 2. 新疆农业大学草地资源与生态自治区重点实验室, 乌鲁木齐, 830052 通讯作者: licong0520@; 作者 豆科基因组学与遗传学, 2010 年, 第 1 卷, 第4 篇 DOI: 10.5376/.2010.01.0004 收稿日期：2010 年7 月25 日 接受日期：2010 年10 月10 日 发表日期：2010 年11 月25 日 本文首次发表在《分子植物育种》印刷版上。现经版权所有人授权，采用《Creative Commons Attribution License》在《豆科基因组学与遗传学》 中文网络版上再次发表与传播。只要对本原作有恰当的引用，版权所有人允许并同意第三方无条件的使用与传播。 关宁等, 2009, 含硫氨基酸基因植物表达载体的构建及对百脉根的转化, 分子植物育种, 7(2): 257-263 (doi: 10.3969/mpb.007.000257) 摘要 用限制性内切酶Nco Ⅰ和Bgl Ⅱ从中间载体pMD18zeolin 和pMD18zein 上切下zeolin 基因(约1 600 bp)和γ-zein 基因(约 720 bp)，将其定向连接在经相同酶切的质粒载体pCAMBIA1302 上，构建成植物表达载体pCBzeolin 和pCBzein 。采用冻融 法将 pCBzeolin 和 pCBzein 导入根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)菌株 LBA4404 ，利用该菌株转化百脉根(Lotus corniculatus L.) 。经过共培养、筛选分化、再生，得到抗性植株。对抗性植株进行了PCR 、RT-PCR 检测表明，γ-zein 和zeolin 基因已经整合到百脉根基因组中，在核酸水平得到了表达。含硫氨基酸数据分析表明，转zeolin 基因植株含硫氨基酸含量极 显著高于转γ-zein 基因植株和对照植株的含量(P0.01)，但转γ-zein 基因植株与对照植株间差异不显著。 关键词 含硫氨基酸基因; 表达载体构建; 百脉根; 转化 Construction of Plant Expression Vectors for Sulphur-amino acid Gene and Transformation to Lotus corniculatus L. 1 1 1 1 2 Guan Ning , Wang Yongxin , Li Cong , Miao Lihong , Zhang Bo 1. Forage Plants’ Genetics and Breeding Laboratory, Institute of Animal Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing, 100193; 2. Key Laboratory of Grassland Resource and Ecology, Xinjiang Agricultural University, Urumqi, 830052 Corresponding author, licong0520@; Authors Abstract Zeolin gene (about 1 600 bp) and γ-zein gene (about 720 bp) were got by cutting from the middle vectors pMD18zeolin and pMD18zein respectively, and were linked to the expression vector