色谱.ppt

换作另外一个通道，比如是植物类的，例如花，那么又对另外一类人有吸引力，那么在海底通道上没有差别的人群也许在这个花的通道上能够看出差别，总之，只要他们之间有差别，总能够找到这个差别把他们区分开。 色谱法的特点 基本概念 二、相关名词 色谱峰：色谱柱流出组分通过检测器系统时所产生的响应信号的微分曲线。 峰底：峰的起点与终点之间的连线。 峰高：从峰的最大值到峰底的距离。 峰宽：在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离。 半峰宽：通过峰高的中点作平行于峰底的直线，此直线与峰两侧相交两点之间的距离。 色谱法示意 气相色谱分离过程 液相色谱过程理论 溶质在色谱过程中的保留 被分离溶质通过色谱柱时，需要不同的洗脱时间。洗脱时间的长短由两部分决定： 一部分与色谱分配过程无关，由系统流体动力学因素（流动相粘度，流速等）决定。 一部分取决于溶质在两相中的分配性质，不同溶质在柱中的保留时间主要取决于溶质在给定两相中分配系数大小决定的。根据分配系数的定义： K＝Cs/Cm K－分配系数； Cs－溶质在固定相中的浓度； Cm－溶质在流动相中的浓度 由上式可知：分配系数大的，说明溶质在固定相中浓度大，所以在固定相中走得慢；反之，分配系数小的，在固定相中走得快。由于色谱柱具有上万块塔板，微小的分配系数差异经过上万块塔板的分离，就变成巨大的差异－不同分配系数的溶质得到分离。 色谱过程动力学 液相色谱过程谱带扩展示意图 三、分子扩散项－轴项扩散项 三、传质阻力 四、范氏方程 理论塔板数和有效塔板数 理论塔板数和有效塔板数的区别是用保留值和调整保留值的关系，由于死体积中的保留时间与分配平衡无关，因此有效塔板数描述的更加准确一些。 分离度R 峰底分离度：等于相邻组分色谱峰保留值之差与色谱峰平均峰底之比。 填充柱与毛细管柱的比较 证明：当组分一半流出色谱柱时 色谱基本保留方程 为了准确定量，要求峰宽要窄，峰形要好。峰形的预测是最佳条件选择的基础。色谱峰的宽窄、峰形的好坏与物质在色谱过程中的运动有关：即与物质在流动相、固定相中的扩散和传输速率有关，也与柱外效应有关。 色谱过程动力学是发展和选择高效色谱柱与高效能色谱方法及进行色谱峰形预测的理论基础。 一、液相色谱过程中的谱带扩展 在理想状态下，溶质在注入柱子内时是一个点，在柱端形成一个浓度均匀的薄片(图中A，B，C)。当溶质通过柱子后它被流动相所稀释，并形成一个均匀分布的柱体。用浓度分布剖面图表示，溶质在色谱柱前端是一个很窄的类似脉冲状的谱带。在色谱柱末端展宽成一个峰（C，B，A）。这种现象称为谱带扩展。 从谱带扩展的机理来看，液相色谱过程和气相色谱过程有许多相似之处。基本上也是由三部分组成： 涡流扩散相 分子扩散相 质量传递相 Am Bm Cm A, B, C Bm Cm Am A B C 二、涡流扩散项－多径扩散项 由于柱子中固定相颗粒装填不均匀，颗粒直径的大小不一，流动相在柱中前进过程中会有不同的路径，不断改变流动方向，从而使组分在流动相中形成紊乱而类似“涡流”的流动。 由于固定相颗粒之间填充时形成的孔隙大小各异，同一组分分子的流动路径不同： 走直径大孔隙的组分先到达终点 碰到许多粒阻，绕行走小孔隙的组分，花费较长时间才抵达终点。 介于二者之间走平均路径的组分，到达终点的时间处于二者之间。 以组分的平均路径为准，有些组分走在前面，有些组分落在后面，使组分出峰时间产生一个统计分布－－色谱峰。 H E T P 线速度（u） A 涡流扩散与固定相、固定相含量及线速度无关。只取决于固定相的几何形状和填充的均匀性。其中最重要的是固定相颗粒的直径dp。 按随机理论模型：δ2/L＝2wdp=A w反映柱内填充物的不均匀程度，当固定相孔隙越不一致，分子走过的流路差别越大，峰形扩展越厉害。dp越小，分子移动步幅小，不仅可以弥补由于固定相小而使w的增加，而且可以降低A值。所以尽量选择细颗粒固定相，填充均匀。 要降低涡流扩散的影响，从下面两方面考虑： 装填柱子要仔细 固定相颗粒度的范围要尽量小－颗粒度要求一致（小于10 um）。 H E T P 线速度（u） B u 当样品注入色谱柱后，由于组分分子不能充满整个色谱柱，因此组分在轴向存在浓度梯度，向前运动的分子势必产生浓度扩散（由高浓度向低浓度扩散），并且是沿着轴向而加速，因此称作轴向扩散。这种过程是自发的，是分子随机运动的结果。 溶质分子的扩散与流动相的流速有关，流速越快，自由分子扩散越慢。在液相色谱中，由于溶质在流动相中的扩散系数很小，大约为10－5(cm2/s)。分子扩散对谱带扩展贡献很小。因此，在不考虑分析速