DNA探针在高中生物学教学中的应用.pdf

笫2 4卷第1 2期2 0 0 8年巾学牛物学Mi d d J e S c h o o 1 B i o l o g y Vo 1 ．2 4 No ．1 2 2 o 0 8 文件编号：1 o 0 3 7 5 8 6 ( 2 o 0 8) 1 2—0 0 0 7一O 2 DN A探针在高中生物学教学中的应用李俊勇( 河北省衡水市武邑中学o 5 3 4 o 0 ) 1 DN A探针的概念D N A探针是一段带有检测标记( 如放射性同位素、荧光分子等) 且顺序已知的与目的基因互补的核酸序列( D N A或R N A) ，长度在几百碱基对以上。它包括整个基因或基因的一部分；可以是D N A本身，或由之转录而来的R N A。现已获得的D N A探针数量很多，有细菌、病毒、真菌、动物和人类细胞D N A探针。2 D NA探针的种类D N A探针可以分为人工合成的D N A探针和天然的克隆D N A探针两种。2 ．1 人工合成的D N A探针用磷酸三酯法或亚磷酸三酯法等化学法人工合成，目前均由D N A合成仪合成。最常见的寡核苷酸探针长度在l 8 —3 0 个碱基之间。其特异性可以根据需要加以改变，以识别靶序列中单碱基变化。2 ．2 天然的克隆D NA探针此类是对天然核酸序列进行克隆得到，大致包括c D N A探针、基因组探针、R N A探针、内含子序列探针和小卫星D N A探针等。天然的克隆探针具有较长的序列和更高的复杂性，因而通常要比寡核苷酸探针具有更高的特异性，一般也容易获得较强的杂交信号。3 DN A探针利用的原理D N A分子杂交原理：利用能互补的D N A单链退火杂交结合成双链，即进行杂交。这种结合是特异的，即严格按照碱基互补配对进行。因此，当用一段已知基因的核苷酸序列作为探针，与被测基因进行接触，若两者的碱基完全配对成双链，则表明被测基因中含有已知的碱基序列。4 D NA探针需满足条件’必须是单链，带有容易被检测出来的标记物( 如放射性同位素、荧光分子等) 。5 D NA探针的应用5 ．1 基因诊断．( 1 )具体步骤：抽取病人的组织或体液作为化验样品，将样品中的D N A分离出来，用化学法或热处理法使样品D N A解旋，将事先制作好的D N A探针引入化验样品中。这些经过标记的探针能够在化验样品中找到互补链，并与之结合( 杂交) 在一起，找不到互补链的D N A探针则可以被洗脱。这样通过对遗留在样品中的标记的D N A探针进行基因分析，就能检出病人所得的病。( 2 )基因诊断的疾病类型。①遗传病的诊断。基因探针对遗传病的产前诊断尤其重要。现已知许多遗传病的致病因及其突变类型，其中由单基因突变所致的遗传病就达6 0 0 0多种。目前人们可以对几种遗传病进行产前诊断，如B 一珠蛋白的D N A探针用来检测镰刀状细胞贫血症；苯丙氨酸化酶基因探针用来检测苯丙酮尿症。②肿瘤的诊断。如用白血病患者细胞中分离出的癌基因制备的D N A探针检测白血病，这不仅对阐明癌症的发生机制具有重要意义，也为在基因水平上