大观霉素的显色反应及其应用.doc

【标题】大观霉素的显色反应及其应用 【作者】杜少敏 【关键词】大观霉素?溴甲酚绿?显色反应?分光光度法 【指导老师】庞向东 【专业】环境科学 【正文】⒈引言大观霉素又称为壮观霉素，是治疗淋病的特效药物，临床上常用其盐酸盐。本品为链霉素Streptomyces spectabilis?所产生的一种由中性糖和氨基环醇一苷键结合而成的氨基环醇类抗生素。性状为白色或类白色结晶性粉末。?在水中易溶，在乙醇、三氯甲烷或乙醚中几乎不溶。大观霉素对淋病奈瑟菌有高度抗菌活性，对产生β内酰胺酶的淋病奈瑟菌也有良好的抗菌活性；对许多肠杆菌科细菌具中度抗菌活性。普罗菲登菌和铜绿假单胞菌通常对本品耐药；对本品耐药的菌株往往对链霉素、庆大霉素、妥布霉素等仍敏感。本品对溶脲支原体有良好作用，对沙眼衣原体和梅毒螺旋体无活性。本品的作用机制是与细菌核糖体30S亚单位结合，抑制细菌蛋白质的合成。本品具有疗效突出、副反应少和使用安全等优点。临床上主要应用于淋球菌所引起的泌尿系感染，适用于对青霉素、四环素等耐药的病人。近年来的研究表明,盐酸大观霉素的药效与剂量密切相关,通过研究大观霉素对不同疾病的量效关系,找出其对不同疾病的最适剂量,必将能够扩大这类药物的临床应用,因此，对盐酸大观霉素药物进行分析研究，对临床上更好和更合理的使用盐酸大观霉素，具有极其深远的意义。目前药典上对大观霉素含量的测定是利用杯碟法[1]（微生物法）进行的,随着科学的进步和研究的深入,渐渐开始采用液相色谱法[2]、气相色谱法[3]、高效毛细管电泳法[4-6]、萃取光度法[7]、分光光度法[8-9]等方法进行研究。分光光度法由于操作简便、快速、仪器价廉、灵敏度较高的优点而得到广泛的应用。因此进一步研究灵敏度高、选择性好的新分光光度法有重要的意义。本研究利用易于普及的紫外-可见分光光度计，采用溴甲酚绿可见分光光度法测定大观霉素的含量。研究中发现在pH=5.02的条件下，大观霉素与溴甲酚绿反应生成离子缔合物，最大正吸收波长位于580nm，大观霉素在一定浓度范围内，遵从朗伯-比尔定律，由此建立了测定大观霉素的光度分析法，并探讨了适宜的反应条件和主要分析化学性质。该法用于市售药物中大观霉素含量的测定，结果满意。⒉实验部分2.1仪器和试剂U-3010型紫外-可见分光光度计（日本株式会社日立高新技术?那珂事业所）；实验室pH计（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；电子天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；大观霉素（Spectinomycin，SPM；长江师范学院分析测试中心提供）标准溶液的浓度1.0×10-4mol/L。溴甲酚绿溶液的浓度1.0×10-3mol/L。Tris-HCl缓冲溶液:用0.1 mol/L HC1和0.2mol/L Tris(三羟甲基氨基甲烷)适当混合，用酸度计检测，配成一系列不同pH值的缓冲溶液。表面活性剂：十二烷基磺酸钠（SDS）10g/L；乳化剂（OP）1%；溴化十六烷基三甲基铵（CTMAB）0.5g/L；十二烷基苯磺酸钠（Triton-x-100?）1%；十二烷基磺酸钠（SLS）0.5g/L。大观霉素为生化试剂，其余试剂均为分析纯，试验用水为超纯水。2.2实验方法于10mL比色管中，依次准确加入2.0mL1.0×10-3 mol/L溴甲酚绿溶液，一定量的1.0×10-4 mol/L SPM标准溶液，再依次准确加入0.5mLpH=5.02的Tris-HCl缓冲溶液，用水稀释至刻度，摇匀。10min后以试剂空白为参比，在最大正吸收波长处以1cm液池测其吸光度。3?结果与讨论3.1吸收光谱按实验方法配制溶液后，于U-3010型紫外-可见分光光度计上扫描吸收光谱（图1、图2）。图1表明，大观霉素（SPM）在可见光区几乎无吸收（谱线1），溴甲酚绿在可见光区产生强烈吸收，最大吸收波长为440nm（谱线2），当在溴甲酚绿溶液中加入大观霉素溶液以后，由于溴甲酚绿在溶液中以大阴离子的形式存在，而盐酸大观霉素极易溶于水中，在水溶液中以大阳离子的形式存在，溴甲酚绿通过静电作用与SPM形成离子缔合物（pH=5.02）。二者发生显色反应生成具有正吸收峰和负吸收峰的物质，最大正吸收波长为580nm，红移140nm（图2谱线1-谱线3）。吸收光谱表明该体系的SPM在一定浓度范围内与吸光度呈良好的线性关系（图2谱线1-谱线3）。???????????????图1?? SPM和溴甲酚绿的吸收光谱??????????????????????图2??大观霉素-溴甲酚绿离子缔合物的吸收光谱??????????????????????????????????????1?大观霉素，以水为参比；?????? 2?溴甲酚绿+Tris-HCl，以水为参比；1～2大观霉素