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* 实验二 培养基配制与灭菌 一、实验目的 学习培养基配制与灭菌的操作方法。 二、实验用具和药品 天平、烧杯(50mL、500mL)、三角瓶、量筒、移液管、橡皮吸球、玻璃棒、玻璃漏斗、玻璃铅笔、精密pH试纸(5.4-7.0)、线绳、包头纸、石棉网。 蔗糖、琼脂、1N NaOH、1N HCl、各种培养基母液。 三、实验方法 （一）培养基配制（每组配培养基300mL，保证下一次实验每一人有一瓶培养基供接种用） 1.每组取50mL烧杯一只，分别根据已定培养目的所需母液浓度将各母液置于烧杯中备用（注意：移液管不能混用）。 2.每组取300mL烧杯一只，用量筒取300mL蒸馏水倒入烧杯中。用玻璃铅笔划好液位线，再将蒸馏水倒出一半。称琼脂倒入烧杯中，再称蔗糖备用。将加入琼脂的烧杯放在石棉网的文火上煮沸，煮时常用玻璃棒搅动，待琼脂溶化后加入蔗糖。蔗糖溶解后，将早已吸好的大量元素、微量元素、铁盐有机物及激素的混合液倒入烧杯中，将装好混合液的烧别用蒸馏水洗三次，倒入300mL烧杯中，加入片刻（注意不要煮沸），将烧杯离火，加蒸馏水定容至液位线。 三、实验方法 （一）培养基配制 3.用1N NaOH或1N HCl将pH值调至5.8。调时应用玻璃棒不断搅动，并用pH试纸测试pH值。 4.用玻璃漏斗，将培养基分别注于三角瓶中（约30 mL/瓶 ）。分注培养基时，不可将培养基倒在三角瓶内、外壁上。如果是培养皿，要将培养基灭菌并适当冷却后再倒入培养皿中（以培养基流动时自行铺满皿底为宜 ）。 三、实验方法 （二）培养基的灭菌 高压蒸汽灭菌法：把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等，放入高压灭菌锅的消毒筒内，将外层锅内加水，水位高度不超过支柱高度。盖好锅盖，上好螺丝。在122-124 ℃下保持15-20min,即可达到消毒目的。 高压蒸汽灭菌注意事项： 1.锅内冷气必须排尽，否则压力表指针虽达到一定压力，但由于锅内冷空气的存在并达不到应有的温度，因而影响灭菌效果。 三、实验方法 （二）培养基的灭菌 高压蒸汽灭菌注意事项： 2.当达到一定压力后，注意在保持压力过程中，严格遵守时间，时间过长会使一些化学物质遭到破坏，影响培养基成分，时间过短则达不到灭菌效果。 3.三角瓶中的液体不超过总体积的70%，否则当温度超过100℃时，培养基会喷溢，造成培养瓶和包头纸的污染。 四、实验安排（共6组） A、B-I： 配制烟草愈伤组织诱导培养基（10瓶/组） A、B-II： 配制番茄种子发芽培养基（5皿+5瓶/组） A、B-III： 配制番茄子叶愈伤组织诱导培养基（5皿+5瓶/组） *
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