1-普通光学显微镜的使用.pptVIP

指导教师： 一、目的与要求 1、熟悉一般光学显微镜的主要结构和功能。 2、掌握显微镜的正确使用方法。 3、熟悉显微镜的保护方法。 二、实验原理 要对细胞进行研究，首先要从其形态结构入手。 要借助显微镜的成像及放大原理，在显微镜下，才能观察到细胞的基本形态结构。 普通光学显微镜的基本结构 普通光学显微镜的构造可分为两部分： 1）机械装置：镜座、镜筒、镜臂、物镜转换器、载物台、标本移动螺旋、粗调螺旋和细调螺旋等部件组成。 2）光学系统：目镜、物镜、聚光器、虹彩光圈、光源等组成 普通光学显微镜基本构造 普通光学显微镜分辨力不会小于0.2μm 分辨力：能把两个物点辨清的最小距离 分辨距离越大，则分辨率越低 人眼的分辨力是0.2mm 所以一般显微镜设计的最大放大倍数通常为1000X 在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高，各物镜的镜口率如下表： 物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm) 10× 0.25 5.40 40× 0.65 0.39 100× 1.30 0.11 放大倍数= 物镜放大倍数×目镜放大倍数 基础知识 三、显微镜概述 可分为光学显微镜和电子显微镜两大类 前者以可见光或紫外光为光源，后者则以电子束为光源 尼康E-600显微镜 数码互动显微镜 体视显微镜 可直接进行解剖及观察并具有正像立体感 荧光显微镜 尼康E800荧光DIC显微镜 荧光显微镜照片（微管呈绿色、微丝红色、核蓝色） 激光共聚焦扫描显微镜（具有高分辨率可进行显微断层扫描） 蓝色为细胞核，绿色为微管 暗视野显微镜 聚光镜中央有挡光片，使照明光线不直接进入物镜 只允许被标本反射和衍射的光线进入物镜 视野的背景是黑的，物体的边缘是亮的 分辨率可比普通显微镜高50倍。 相差显微镜 偏光显微镜 用于检测具有双折射性的物质，如纤维丝、纺锤体、胶原、染色体等等。 玻璃片上的晶体 微分干涉差显微镜 （图像具有浮雕感） 倒置显微镜（组织培养中长工作距离的） 组成和普通显微镜一样，只不过物镜与照明系统颠倒，前者在载物台之下，后者在载物台之上（右图），用于观察培养的活细胞，具有相差物镜。 显微操作技术 尼康NT-88NE显微操作/注射仪 四、实验器材 1、标本片 2、仪器及其它用具：显微镜、擦镜纸等 五、操作步骤 显微观察步骤 1）低倍镜观察（10×）： 2）高倍镜观察（40×）： 使用前注意 1、在显微镜的移动过程中，必须一只手握镜臂，另一只手托住底座。 2、显微镜放在实验桌上，位于身体左前方，离桌子边缘30cm；身体右侧放记录本和绘图纸等 . 3、开显微镜：插电源 打开电源 调节光源强弱 放载玻片 观察 4、检查一下各部件是否完整和正常；必要的清洁工作。 低倍镜的操作 1.首先选用低倍物镜，转动粗调节器，从侧面观察物镜与制片之间的距离，同时调节压片夹，使目标物体居于光源中央。 2.当制片接近物镜时，将粗调节器向下旋转，眼睛注视物镜，以防物镜和载玻片相碰，当物镜的尖端距载玻片约0.5cm处时停止旋转。 3. 目镜观察，调节粗、细调节器直至目的物清晰为止。 高倍镜的操作 1. 使用高倍镜之前，先用低倍镜观察，将目的物移至视野正中央。 2. 旋动转换器换成高倍镜，调节细调节器直至目的物清晰 3. 如果高倍镜触及载玻片应立即停止旋动，说明原来低倍镜没有调准焦距，应重调低倍镜，找到目的物。 使用注意事项： 1.看到影像后，用光圈调节光束的粗细。 2.遇到困难时，不要鲁莽行事，应向老师请教；物镜、目镜、聚光器里都是透镜，易于损伤。 3.关显微镜：取下载玻片 将光源调到最弱 将载物台调到最低位置 关电源 拔下电源 4.试剂、制片和工具，不要相互挪用。人为损坏、遗失的显微镜、制片、测微尺、工具都要赔偿。 六、实验数据及处理结果 绘出你在镜下观察到的细胞形态及其排列方式。 实验报告格式 一、实验项目名称 二、实验目的 三、实验基本原理 四、主要仪器设备及耗材 五、实验步骤 六、实验数据及处理结果