肝纤维化论文：羟基喜树碱对大鼠肝纤维化防治作用及部分机制的研究.docVIP

肝纤维化论文：羟基喜树碱对大鼠肝纤维化防治作用及部分机制的研究 【中文摘要】观察HCPT对肝纤维化大鼠肝功能、纤维化程度等影响,研究HCPT对肝纤维化大鼠模型的防治作用；检测肝组织中Bax、Bcl-2基因表达、a-SMA蛋白表达、TUNEL染色等指标,初步探讨HCPT抗大鼠肝纤维化的作用机制。为肝纤维化的治疗探索新途径提供实验基础；为拓宽HCPT的临床应用范围提供理论依据。方法：64只SD大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量HCPT治疗组、中剂量HCPT治疗组、高剂量HCPT治疗组共5组。采用40% CCl4花生油溶液0.2ml/100g,2次/周诱导大鼠肝纤维化模型。正常组给予生理盐水1 ml/kg腹腔注射,每周2次；模型组仅给予CCl4造模；其余3组造模同时分别给予0.25mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kgHCPT腹腔注射每周3次,共8周。各组分别在实验的第8周末进行以下指标检测：①采用全自动生化仪检测各组大鼠血清ALT、AST、ALB、TP、A/G；②采用全自动血球分析仪检测大鼠血白细胞、血小板；③取肝脏相同部位用于石蜡切片,分别进行HE染色、Masson三色染色,对病理标本进行纤维化程度分期；④对肝脏组织石蜡切片进行a-SMA免疫组织化学检测,并进行TUNEL染色；⑤取肝脏相同部位采用RT-PCR技术检测Bax、Bcl-2 mRNA表达以及Bax/Bcl-2mRNA比值的变化。结果：1.各组肝功能：模型组的ALT、AST与正常组相比均明显升高(P值均0.05)；PLT检测仅正常组与模型组有统计学差异(P0.05)。3.各组肝脏大体形态观察：正常组大鼠肝脏外观红润光滑,边缘锐利,质地柔软；模型组肝脏体积显著缩小,与肝周组织粘连严重,表面凹凸不平,肝叶边缘粗顿,质地较硬；各HCPT治疗组肝脏体积均大于模型组,表面略有灰暗,未见有明显增生结节,质地尚柔软。4.病理切片HE及Masson染色和肝纤维化病理分期：①病理组织学观察：正常组肝小叶结构完整,无纤维增生,无炎症细胞侵润；模型组肝小叶结构紊乱,小叶被纤维分割,较多假小叶形成,并有较多炎症细胞侵润,同时可见肝细胞气球样变及大泡性脂肪变性；各剂量HCPT治疗组较模型组明显改善,肝小叶结构较清晰,纤维组织不同程度增生以汇管区明显,无明显假小叶形成,仅于汇管区周围见部分肝细胞脂肪变性,为大小泡混合性脂肪变性,可见少量炎症细胞侵润。②各组肝纤维化病理分期：模型组的肝纤维化程度与正常组相比明显升高(P0.05)。5. RT-PCR检测肝组织Bax、Bcl-2mRNA表达：模型组的Bax、Bcl-2mRNA与正常组相比均明显升高(P值均0.05)。7.肝组织TUNEL染色：TUNEL染色显示阳性着色细胞主要集中于肝脏组织汇管区,以纤维间隔中最为明显,其分布情况与a-SMA蛋白免疫组织化学染色区域一致；而肝细胞未见明显染色。结论：HCPT对四氯化碳诱导的肝纤维化大鼠模型具有防治作用；HCPT作用机制可能为HCPT抑制a-SMA蛋白的表达,抑制HSCs活化增值；上调Bax/ Bcl-2mRNA比值,诱导HSCs凋亡,从而改善了肝纤维化进程,达到了抗肝纤维化的治疗效果；同时本研究采用HCPT的给药剂量、给药途径、给药间隔等是安全、可行的；对HCPT防治其他组织器官纤维化(如肺纤维化等)的研究具有借鉴意义。 【英文摘要】:To observe the preventive and therapeutic effect of hydroxycamptothecin (HCPT) in CC14-induced liver fibrosis in rats by detect the Liver function and the degree of fibrosis; Preliminary study the mechanism of the HCPT by detect the Bax、Bcl-2mRNA level,the a-SMA expression and the TUNEL stain in liver. To explore new ways for the treatment of liver fibrosis and to provide theoretic evidence for expanding the clinical apply of the drug.Methods:64 SD rats were randomly divided into 5 groups:Normal group, Model group, Low dose treatment group, Intermediate-dose group and high-dose group.H