1.2__基因工程的基本操作程序.pptVIP

（2）、将目的基因导入动物细胞 方法-显微注射技术 程序 原核细胞的基因结构 原核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 真核细胞的基因结构 * * ① 目的基因的获取 ② 基因表达载体的构建（核心） ③ 将目的基因导入受体细胞 ④ 目的基因的检测与鉴定 第一步：目的基因的获取 1、目的基因主要是指 ______________________ 编码蛋白质的结构基因 2、方法： 直接分离法： 人工合成法 如从基因文库中获取目的基因 反转录法 化学合成法 利用PCR技术扩增 基因文库 基因组文库 部分基因文库 （如:cDNA文库） 基因文库？ (1) 从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库 受体菌的整个群体包含了这种生物的全部基因 基因组文库的构建模式图 cDNA文库的构建模式图 杂交双链 (单链RNA/单链DNA) 单链DNA 反转录酶 双链DNA (cDNA) 某种生物的mRNA 某种酶 DNA聚合酶 与载体连接后导入受体菌贮存，组成cDNA文库 基因组文库与cDNA文库的比较P10表 物种间的基因交流 基因多少 基因中是否有内含子 基因中是否有启动子 大小 cDNA文库 基因组文库 文库类型 小 大 有 无 有 无 某种生物的全部基因 某种生物的部分基因 部分基因可以 可以 ①概念： PCR全称为_______________，是一项在生物____复制________________的核酸合成技术 ③条件：_______________________、________、____________________、 __________________. ②原理：__________ 聚合酶链式反应 体外 特定DNA片段 DNA复制 已知基因的核苷酸序列 四种脱氧核苷酸 1对引物 DNA聚合酶(Taq酶) （2）利用PCR技术扩增目的基因 PCR扩增DNA的过程： 1、高温变性（90℃-95℃）： 双链DNA模板在热作用下， _____断裂，形成______ 2、低温复性（55℃-65℃）： 系统温度降低，引物与 DNA模板结合，形成局部 ________。 3、中温延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下，合成与模板互补的 ________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 结果 酶 场所 解旋方式 不同点 条件 原料 原理 相同点 DNA复制 PCR技术 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的DNA片段 形成整个DNA分子 （3）人工合成 反转录法： 目的基因的mRNA 杂交双链 (单链RNA/单链DNA) 单链DNA 反转录酶 DNA聚合酶 双链DNA (目的基因) 根据已知的氨基酸序列合成DNA法 ： 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 基因的脱氧核苷酸序列 推测 推测 目的基因 化学合成 第二步：基因表达载体的构建（核心） 2、基因表达载体的组成？ ①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代 ②使目的基因能够表达和发挥作用 启动子 目的基因 终止子 标记基因 1、基因表达载体构建的目的？（P11） 复制原点 1、启动子？终止子？标记基因？它们的作用是？ 2、基因表达载体中的启动子、终止子是目的基因带有的？还是质粒上固有的？ 3、标记基因是质粒上固有的还是后加上去的？ 4、基因表达载体的构建是千篇一律的吗？ 第三步：将目的基因导入受体细胞 目的基因进入_________内，并且在 受体细胞内维持_____和_____的过程 转化 —— 受体细胞 稳定 表达 1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 （1）农杆菌介绍： （2）适用范围及原理 组织培养技术 1、将目的基因导入植物细胞的方法：农杆菌转化法 （1）农杆菌： （2）适用范围： 感染双子叶植物和裸子植物 适用于 单子叶植物 基因枪法 花粉管通道法 适用于 被子植物 目的基因表达载体提纯 取卵（受精卵） 显微注射受精卵 新性状动物 细菌 用Ca2+处理细胞 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 （3）将目的基因导入微生物细胞 第四步：目的基因的检测与鉴定 检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 1、导入检测 目的： 方法： DNA分子杂交 从转基因生物中提取的基因组DNA 探针？ 杂交的对象？ 用放