生化检验技术基础.pptVIP

生化检验技术基础与进展 上海长征医院实验诊断科 于嘉屏 ? 一、比色分析 1．比色分析理论――Beer-Lambert 定律 A = lg（I0/I）＝KCL 或 I＝I0×10-KCL I0：入射光强度 I：透过光强度 K：常数 C：溶液浓度 L：溶液的厚度 （1）郎伯定律 I0 It l L -dI∝Idl， -dI＝aIdl， dI/I=-adl 积分 It L dI/I ＝ -a dl 得： ln(I0 / It)＝-aL I0 0 将ln改为lg，则为：lg（ I0 / It）＝-0.434aL＝K’L 令lg（ I0 / It） ＝A，则A＝ K’L （2）比尔定律 A＝K”C （3）郎伯-比尔定律 A＝KLC 透光率（transmittance，T，透射率） T＝I / I0 吸光度（absorbance，A） 光密度（eptical density，D或OD） A＝lg I0/I＝-lgT T＝10-A＝10-KCL A＝KCL 当L用cm，C用mol/L表示，则K即称之为摩尔吸光系数，用ε表示。 当C＝1mol/L，L＝1cm，则ε＝A。 T％与A的关系 －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 透光率（T） 吸光度（A） －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 1 0.000 0.75 0.125 0.5 0.301 0.25 0.602 0.17 0.770 0.1 1.000 0.05 1.301 0.01 2.000 0.001 3.000 －－－－－－－－－－－－－－－－－－－－－ 2．影响因素 （1）化学因素的影响 溶液中溶质可因浓度的改变而发生离解、缔合，与溶剂间的作用等原因而出现偏离比尔定律的现象。由化学因素引起的偏离，有时可控制溶液条件设法减免。此外，能产生荧光的物质也可导致偏离比尔定律。 （2）非单色光的影响 比尔定律的一个重要条件是单色光，但在比色分析中常有不同波长的光同时存在。这就使吸光度发生改变，从而偏离比尔定律。 波长的选择 （3）光学因素的影响 散射是向空间各个方向，而使透射光减弱。反射可使光能损失，当光线通过两种不同介质时，则发生反射。当样本溶液与空白溶液的折射