第14课时_基因工程和细胞工程.pptVIP

3.(2011·安徽卷)家蚕细胞具有高效表达外源基因的能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。 (1)进行转基因操作前，需用__________________ 酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。 (2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的__________和_________之间。 胰蛋白(或胶原蛋白) 启动子 终止子 (3)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。该PCR反应体系的主要成分应包含：扩增缓冲液(含Mg2＋)、水、4种脱氧核糖核苷酸、模板DNA、__________________________和_____________。 (4)利用生物反应器培养家蚕细胞时，贴壁生长的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以____________________ __________，增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。 对干扰素基因特异的DNA引物对 TaqDNA聚合酶 扩大细胞贴壁生长的附着面积 解析：(1)将动物组织利用胰蛋白酶处理可获得单个细胞。 (2)基因表达载体上目的基因的首端要有启动子，尾端要有终止子。 (3)PCR反应体系的主要成分包括：扩增缓冲液、水、4种脱氧核苷酸、模板DNA、对干扰素基因特异的引物对、TaqDNA聚合酶。 (4)此种做法还可扩大细胞贴壁生长的附着面积。 名　称 作　用 参与的生理过程应用 限制性核酸内切酶 切割某种特定的脱氧核苷酸序列 基因工程 DNA连接酶 连接两个DNA片段 基因工程 DNA聚合酶 在脱氧核苷酸链上添加单个脱氧酸 DNA复制 RNA聚合酶 在核苷酸链上添加单个核糖核苷酸 转录 (一)基因工程的工具及操作程序 1．几种酶的区别 名　称 作　用 参与的生理 过程应用 解旋酶 使碱基间氢键断裂 DNA复制及转录 逆转录酶 以RNA为模板合成DNA 逆转录及基因工程 特别注意： (1)限制性核酸内切酶的来源：多数来自原核生物；作用特点：主要切割外源DNA，对自身的DNA不起作用从而达到保护自身的目的；作用结果：形成DNA片断末端。 (2)各种酶都具有专一性，特别是限制酶只能识别特定的脱氧核苷酸序列，并在特定的碱基之间切开。 2．基因工程的操作程序中目的基因的获取 ①基因文库：是将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中通过克隆而储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，②基因组文库：基因文库中含有一种生物所有的基因就叫做基因组文库，③部分基因文库：含有一种生物的部分基因，就叫做部分基因文库，如cDNA文库 。 3．基因工程的基本操作程序 (1)获取目的基因 方法：①从基因文库中获取； ②利用PCR(聚合酶链式反应)技术扩增目的基因； ③人工合成。 (2)基因表达载体的构建(基因工程的核心) ①构建目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代，同时，使目的基因能够表达和发挥作用。 ②一个基因表达载体的组成：目的基因、启动子、终止子、标记基因等。 ③构建方法 (3)将目的基因导入受体细胞—转化 ①转化方法不同：植物—农杆菌转化法，基因枪法；动物—显微注射法；微生物—感受态细胞法。 ②转化方法不同，所用的受体细胞的种类也不同：植物—体细胞，可经过组织培养成为完整的植物体；动物—受精卵，因体细胞的全能性受到限制。 (4)目的基因的检测与鉴定 项　目 基因工程 蛋白质工程 原理 基因重组 中心法则的逆转 区别 过　 程 获取目的基因→构建表达载体→导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定 预期蛋白质功能→设计蛋白质结构→推测氨基酸序列→合成DNA→表达出蛋白质 实质 定向改造生物的遗传特性，以获得人类所需要的生物类型或生物产品(基因的异体表达) 定向改造或生产人类所需要的蛋白质 结果 生产自然界中已经有的蛋白质 生产自然界中没有的蛋白质 (二)基因工程和蛋白质工程比较 项　目 基因工程 蛋白质工程 联　系 蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程，对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质必须通过基因修饰或基因合成来实现 蛋白质工程是在基因工程的基础上延伸出来的第二代基因工程，对现有蛋白质的改造或制造新的蛋白质必须通过基因修饰或基因合成来实现 请回答下列问题： 限制酶 BamHⅠ H