孔雀石绿与DNA相互作用的光谱研究.docVIP

【标题】孔雀石绿与DNA相互作用的光谱研究 【作者】尹 艳 【关键词】荧光光谱；孔雀石绿；DNA；溴化乙锭；相互作用 【指导老师】曹 团 武 【专业】环境科学 【正文】1前言近年来，由于医药学和生命科学的发展，研究小分子与DNA相互作用的机理，对现代药物动力学的认识和开发具有专一、高效性的新药都具有极其重要的意义[1]。DNA是生命体中重要的一类生物大分子，对于生命遗传密码的翻译、转录、复制起着非常重要的作用。近年来，为了进一步探索和认识DNA的性质、结构、行为、形态，揭示生命之奥妙，对金属配合物与生物大分子DNA的相互作用的研究已成为生物无机化学领域十分活跃的研究课题。通常，小分子与DNA的非共价键结合作用有三种方式：嵌入作用，沟槽作用和静电结合[2-3]，为研究提供了理论依据。孔雀石绿又名碱性绿,孔雀绿,其化学式为C23H26N2O，分子量346.47。它是一种合成的三芳基甲烷化学物质,易溶于水和乙醇,为深绿色结晶状固体,因外观颜色呈孔雀石绿而得名。其即是工业性染料,又是一种杀真菌剂,可致癌。孔雀石绿可用作生物染色剂，把细胞或细胞组织染成蓝绿色，方便在显微镜下研究。孔雀石绿也用作丝绸、皮革和纸张的染料。目前已有不少文献资料报道了小分子和DNA相互作用的机理研究，其中主要采用了光谱法，量热法，电化学法等。光谱法又包括紫外—可见光谱法和荧光光谱法[4-5]。一些小分子配体与DNA结合后其分子结构发生了一定的变化，相应地出现了吸收峰位移或谱峰宽度变化，据此可研究DNA与小分子间的结合强弱和结合机理，因而紫外—可见吸收光谱法也是这一研究领域中最方便，最常用的一种技术。荧光技术由于其较紫外—可见吸收方法具有更高的精度和特异性，因此被更为广泛的用于研究小分子与DNA的相互作用。量热法与其他方法相比有其自身的优点，譬如在测量中不需添加任何试剂，不会引入干扰生命系统正常活动的因素也不需要制成透明清澈的溶液，故可直接研究离体的组织和悬浮液，尽管缺乏特异性但由于生命系统本身具有特异性，所以这种非特异性方法有时可以得到用特异性方法得不到的某些结果，这有助于发现新现象和新规律。电化学方法是光谱方法的有益补充，对于一些吸收光谱比较弱或由于其电子跃迁谱带与大分子本身的吸收发生重叠，而无法用光谱方法来研究的分子就有可能用直接伏安法等电化学方法方便地进行研究.荧光分析作为一种高灵敏度的现代仪器分析方法，其在生命科学研究中发挥着愈来愈重要的作用，有着极大的潜力和广阔的前景。但是荧光分析作为一种重要的分析手段，与分光光度法相比，荧光分析法起步较晚，其应用仍满足小了生产和科研的需要，特别是随着生产的发展，科技的进步，人民物质生活水平的提高，给荧光分析法提出了更高要求，特别是二十一世纪生物科学突飞猛进发展，为荧光分析的发展和应用创造条件和机遇。因此，从荧光分析现状看，要使其小断发展和完善，仍需做以下努力：1.在荧光免疫分析中，开发和研究高量子效率，低背景荧光底物和测定体系，使荧光免疫分析法小断完善和发展，以满足临床、环保等高灵敏、高选择性测定的要求；2.要使荧光分析法更广泛的应用于药物分析，仅要拓宽荧光分析测定的药物的范围，提高分析的灵敏度，而目要应用荧光分析?研究药物的分布形态，药物与载体(如环糊精)之相互作用等，为制剂开发、指导临床合理用药发挥更大的作用；3.充分发挥药物荧光分析灵敏度高，选择性好及可提供光谱信息多、简便易行等优点。开展药物与生物大分子(如蛋白质和核酸)及药物与受体膜，受体靶分子之间的相互作用。为在分子水平上研究药物的作用机理提供一定的手段和方法。目前关于小分子和DNA相互作用的机理研究报道主要有以下这些：张爱梅等运用荧光光谱法研究利福平与DNA的相互作用[6]。张霞等运用荧光光谱法研究罗丹明B与DNA的相互作用，在pH=7.4的三羟甲基胺基甲烷一盐酸(Tris—HC1)的缓冲溶液中，利用荧光分光光度法研究了小分子染料罗丹明B(RB)与小牛胸腺DNA(CTDNA)的相互作用。实验考察了离子强度、阴离子猝灭剂l(I对RB—DNA体系的影响。结果表明：DNA的存在使得RB的荧光强度显著降低，RB以沟槽模式与DNA相互作用[7]。樊娟等运用荧光光谱法、紫外吸收光谱法和粘度法研究了染料木素及其镧配合物与DNA相互作用的研究。结果发现：该配合物的荧光强度在加入DNA后增大，而染料木素则降低；配合物使DNA—EB体系的荧光强度降低要明显强于染料木素；配合物相较于配体与DNA相互作用之后，其紫外光谱的减色效应以及红移现象均强于配体；配合物使DNA粘度的增加的程度也大于配体。结果显示，染料木素及其镧(III)配合物都能与DNA发生插入结合作用，但配合物与DNA结合得更加紧密。抗肿瘤活性体外测试的结果表明，无论染料木素还是配合