丹参分散片中总丹参酮和丹参酮ⅡA的含量测定方法研究.doc

丹参分散片中总丹参酮和丹参酮ⅡA的含量测定方法研究 钱佳华，宋崎*，马能溢 （上海市中药研究所，201203） 摘要：目的 建立丹参分散片的总丹参酮和丹参酮ⅡA的含量测定方法。 方法 采用UV测定丹参分散片中总丹参酮,以丹参酮ⅡA为对照品，检测波长：268nm；采用HPLC法测定丹参分散片中丹参酮ⅡA，流动相：甲醇－水（75：25）；流速：1ml/min；柱温：25℃；检测波长：270nm。 结果 总丹参酮在4.32～21.60 (g/ml范围内，吸收度与溶液浓度线性关系良好，r＝0.9999（n＝5），方法回收率为98.25％；丹参酮ⅡA在0.02～0.20(g范围内与其峰面积呈良好线性关系，r＝0.9998（n＝6），方法回收率为99.64％。 结论 该方法简便、准确，重复性好，可有效控制丹参分散片的质量。 关键词：丹参分散片 总丹参酮 丹参酮ⅡA UV HPLC [所属专业]药剂（药剂质量标准研究） 丹参为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根，性微寒味苦，具有活血化瘀、养血安神、凉血消痈的功效，所以丹参制剂为治疗心肌缺血性冠心病、心绞痛的常用中成药[]，其有效成份主要为脂溶性的丹参酮类和水溶性酚酸类物质，丹参酮ⅡA是主要脂溶性有效成份[2]，有明显的药理活性。在临床心血管疾病的治疗中，丹参酮ⅡA具有抗动脉粥样硬化、抑制心肌肥厚、抗心律失常和抗心肌缺氧等多种作用，其在冠心病、心绞痛治疗中可获得满意疗效。故本文制备了丹参分散片，分别采用UV和HPLC对总丹参酮和丹参酮ⅡA进行含量测定方法的研究，方法简单、准确。 1仪器与试药 1.1仪器 岛津高效液相色谱仪：SCL－10ATVP化学工作站、SPD-10AVP紫外检测器；岛津2401PC型紫外分光光度仪；CQ型超声波清洗器（上海沪超声波仪器有限公司）；分析天平（十万分之一，Sartorius公司）。 1.2 试药 丹参酮ⅡA对照品（中国药品生物制品检定所，批号110766－200417）；丹参分散片（自制）；甲醇（色谱纯、Fisher公司）；丙酮（分析纯）；甲醇（分析纯）；氯仿（分析纯）。 2方法与结果 2.1总丹参酮的测定 2.1.1溶液制备 对照品溶液制备：精密称取丹参酮ⅡA对照品适量，加氯仿制成每ml含0.108mg的溶液，即得。 供试品溶液制备：①取丹参分散片10片，研细。取约0.2g粉末，精密称定，加入50ml氯仿，超声15min，放冷，滤过，蒸干。②残渣加NaOH溶液（pH=10）40ml溶解，过滤，蒸干。③残渣加丙酮溶解，过滤，滤液蒸干。④残渣用氯仿溶解，过滤，用氯仿定容至25ml，摇匀。 2.1.2最大吸收峰的波长确定 取2.1.1项制备的对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液。对照品溶液需稀释：精密吸取对照品溶液2ml，置于10ml容量瓶，加氯仿至刻度，摇匀，即得。在190～400nm波长范围内进行扫描，结果对照品和样品均在268nm处有最 大吸收；阴性样品则在260～280nm范围内无最大吸收。（见图1）  图1最大紫外吸收度的波长确定 1.对照品 2.样品 3 .阴性 2.1.3线性关系考察 分别精密吸取2.1.1项下制备的对照品溶液1、2、3、4、5ml，置于25ml容量瓶中，加氯仿稀释至刻度，摇匀，即得。以氯仿为空白，在268nm波长处测定吸收度。以吸收度A为纵坐标、浓度C（(g/ml）为横坐标绘制标准曲线，得回归方程：A＝0.128+0.028472C，r＝0.9999，表明总丹参酮在4.32～21.60(g/ml范围内，吸收度与溶液浓度呈良好的线性关系。 2.1.4重复性试验 取丹参分散片5份，按2.1.1项下方法制备供试品溶液，测定吸收度，结果RSD＝1.34％，结果表明本方法重复性好。 2.1.5加样回收率试验 取已知含量的丹参分散片样品5份，每份约取0.1g，精密称定，分别精密量取丹参酮ⅡA溶液2ml（0.095mg/ml），加入50ml氯仿，超声15min，放冷，滤过，蒸干。残渣加40mlNaOH溶液（pH=10）溶解，过滤，蒸干。残渣加丙酮溶解，过滤。滤液蒸干，残渣用氯仿溶解，过滤，用氯仿定容至25ml，摇匀，即得。测定吸收度，根据标准曲线计算样品中总丹参酮的含量。结果见表1。 表1加样回收率 样品 含量 (mg) 加入量 (mg) 实测值 (mg) 回收率 （％） 平均 回收率（％） RSD （％） 0.21 0.19 0.39 97.50 97.50 1.81 0.21 0.19 0.38 95.00 0.22 0.19 0.41 100.00 0.21 0.19 0.39 97.50 0.21 0.19 0.39 97.50 2.1