《人体显微形态学》实验细胞器及细胞骨架观察.pptVIP

* * 细胞器及细胞骨架观察 实验目的： 1、进一步熟悉低倍镜、高倍镜及油镜的使用； 2、观察细胞器在光镜下的形态结构； 3、学习细胞骨架简易制片及观察方法。 二、实验内容 1、高尔基体观察（脊神经节切片） 2、线粒体观察（小肠横切片） 3、中心体观察（马蛔虫子宫切片） 4、细胞骨架标本制备及观察（洋葱表皮） 细胞器观察注意事项： 1、先在低倍镜下观察，找到需放大观 察的结构，转换高倍镜观察。只有线 粒体标本需用油镜观察 （见实验指导P40-41）。 2、油镜的正确使用方法，镜头、玻片 标本的及时清洁。 细胞骨架标本制备（P41） 当细胞用适当浓度的triton X —100溶液 （聚乙二醇辛基苯基醚，是一种非离子 去垢剂）处理，能够溶解质膜结构中及 细胞内许多蛋白质，而细胞骨架中的蛋 白质却不被破坏，经固定和考马斯亮兰 （非特异性蛋白质染料）染色后，胞质 背景着色弱，有利微丝的显示，可在光 镜下观察到由微丝组成的纤维束。 方法 1.将0.5×0.5cm大小的洋葱表皮细胞置于小 培养皿中，用磷酸缓冲液（PBS）洗涤3次， 每次3分钟。 2. 将洋葱表皮细胞浸在1%tritonX-100液中， 置于37℃恒温箱处理20~30分钟，以除掉骨架 以外的蛋白质。 3.立即用M-缓冲液轻轻地洗涤3次，每次3分钟， 使细胞骨架稳定。 4.在3%戊二醛液