生物化学DNA修复的论文.docVIP

中央民族大学生命与环境科学学院 生物化学期中论文 2012年5月20日 DNA自我修复的原理及研究现况 罗斌圣 中央民族大学北京市海淀区 100081 摘要：本文对DNA的自我修复进行了大体上的介绍，并且阐述了近几年来对于DNA的自我修复的研究成果和最新进展。 关键词：DNA自我修复，研究现状 前言 DNA 修复是一系列与恢复正常DNA 序列结构和维持遗传信息相对稳定有关的细胞反应,细胞为了存活而容忍某种类型的DNA 损伤或不正常的碱基序列也包括在该定义范围内。DNA 修复基因在进化上高度保守[1 ]且与许多疾病有关,例如:着色性干皮病、运动失调毛细血管扩张症、遗传性非息肉结肠癌和乳腺癌等 DNA修复类型及其原理 1.1DNA损伤及其引发因素 DNA的损伤一般可以通过其引发的因素分为两种。一类是环境因素引发，另一类是由自身引发的。 其中环境因素又分为物理因素，化学因素以及生物因素。在物理因素中，包括紫外线紫外线可以形成嘧啶二聚体，使转录终止，然后复制受阻；还有电离辐射比如αβγX-射线等，主要通过电离作用造成损伤，可造成多种损伤，如DNA断裂、碱基脱落、杂环破裂、氧化等。而化学因素里面包括烷化剂，有活泼烷基，可转移到碱基或磷酸上，如硫酸二甲酯、芥子气等。而且鸟嘌呤的O6和N7最易烷化，会导致错配(GT)或脱落。磷酸三酯不稳定，易断裂。并且双功能试剂可造成交联。另外碱基或核苷类似物也可以造成损伤：FU、BrdU、6-巯基嘌呤等。可竞争抑制核苷酸合成或掺入核酸导致错配。还有臭名昭著的亚硝酸盐及亚硝胺：前者造成脱氨，后者氧化后生成烷化剂和自由基。代谢活化化合物：如苯并笓、黄曲霉毒素等。经混合功能氧化酶催化形成环氧化物，与核酸结合，也会造成突变。以上物理及化学因素统称诱变剂。另外还有生物因素，DNA、RNA肿瘤病毒可插入基因组，引起突变。 第二大类自身引发损伤的称为自发性损伤。其主要出现的原因可分为几大类。 1.复制时的碱基错配； 2.互变异构：A=NH时可形成A=C，G－OH时可形成GT三键配对； 　　 3.碱基脱氨：会导致C-U，A-I，G-X 这三种少见的不规则的配对； 　4.碱基丢失：大肠杆菌每代丢失一个嘌呤，哺乳动物可达一万个。而嘧啶丢失几率只有嘌呤的1/20。 1.2 DNA损伤的修复 1.2 .1 DNA损伤光修复（直接修复） 对于DNA的损伤最简单的修复方式是通过一步反应修复，把损伤点的序列恢复到原状。在有光的条件下光复活酶类可以直接和损伤的DNA结合，来扭转紫外线或者化疗药物引起的DNA损伤，而且光复活酶也具有较特殊的性质，其活性可以通过高压氧诱导。另一种修复酶是甲基鸟嘌呤甲基转移酶(O62methylguanine DNAmethylt ransferase ,MGMT) ,它对修复甲基化损伤非常重要。经过研究发现20 %的人类肿瘤细胞系中这种酶的活性是降低的。另外,这种酶的活性还与肿瘤发生和抗药性有关,动物体内高水平的其活性能抵御氯乙基亚硝基尿和甲基亚硝基尿诱导的肿瘤形成。 1.2 .2 DNA碱基切除修复 碱基切除修复是一个多步骤的需要几种修复体系参与的复杂的系统。它主要特点是DNA糖基化酶催化的DNA未配对碱基的释放。 在细胞内有多种特异的核酸内切酶，可识别DNA的损伤部位，在其附近将DNA单链切开，再由外切酶将损伤链切除，由聚合酶以完整链为模板进行修复合成，最后有连接酶封口。 碱基脱氨形成的尿嘧啶、黄嘌呤和次黄嘌呤可被专一的N-糖苷酶切除，然后用AP（apurinic/apyrimidinic，缺嘌呤或缺嘧啶）核酸内切酶打开磷酸二酯键，进行切除修复。DNA合成时消耗NADPH合成胸腺嘧啶，可与胞嘧啶脱氨形成的尿嘧啶相区别，提高复制的忠实性。RNA是不修复的，所以采用“廉价”的尿嘧啶。 切除修复不需光照，也称暗修复。大肠杆菌中有UvrABC系统，可切除修复嘧啶二聚体。人体缺乏系统则发生“着色性干皮病”，皮肤干燥，有色素沉着，易患皮肤癌。可加入T4内切酶治疗。大部分DNA损伤修复都依赖于DNA的修复合成,所以对修复合成的测定常用来作为DNA修复的检测方法。常用的有以下几种： 放射自显影法 在细胞培养物中加入氚标记的胸腺嘧啶核苷等放射源,用放射自显影方法计数银颗粒数来测定修复合成过程中参入到DNA分子中的量。 液体闪烁计数法 用液体闪烁计数器测定培养物中的放射源因修复合成而参入到DNA分子中的量。这一方法适用于大批量样本。 超速离心法 　一种应用比较广泛的方法，可应用于切除修复、复制后修复及链断裂修复方式的检测。一般是用氚标记溴脱氧尿嘧啶核苷等参入到修复合成的DNA分子中去以改变DNA分子的重量(BrdU的分子量比尿嘧啶核苷大),通过超速离心