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脂肪酶工业应用与改造研究进展 摘要:脂肪酶( Lipase, EC3. 1. 1. 3,甘油酯水解酶)是分解脂肪的酶，广泛地分布于自然界。利用蛋白质工程技术 ,提高微生物脂肪酶的特异性、 活性和稳定性 ,对提高微生物脂肪酶制剂产品的市场竞争能力 ,扩大微生物脂肪酶的应用领域 ,具有重要的意义。本文通过对氨基酸组成和晶体结构以及酶的特性等最新研究成果综述了脂肪酶改造的研究进展和讨论了脂肪酶的工业应用。 关键词：脂肪酶工业应用，分子改造，定向进化，脂肪酶 Abstract: Lipase (triacylglycerol acylhydrolase EC ) is a class of hydrolase which catalyzes the hydrolysis of triglycerides to glycerol and free fatting acids over an oil-water interface. Lipase is available everywhere. The technology of protein engineering has been successfully applied to improve the activity and stability of microbial lipases, which will raise the competitive capacity of microbial lipase preparations and enlarge theirs application fields. In this paper, the composition of amino acid, the structure of crystal and the Characteristics of the enzyme are stated and the modification of lipase and application of lipase are summarized. Key words: the industrial application of lipase, molecular modification, orthogenesis, lipase 1引言 脂肪酶( Lipase, EC3. 1. 1. 3,甘油酯水解酶)是分解脂肪的酶[1]。在动植物体和微生物中普遍存在,它是一类特殊的酯键水解酶, 催化如下反应: 甘油三酯+ 水= 甘油+ 游离脂肪酸。它的另一重要特征是只作用于异相系统, 即在油(或脂) 一水界面上作用,对均匀分散的或水溶性底物无作用即使作用也极缓慢,因此脂肪酶也可说是专门在异相系统或水不溶性系统的油(脂) 水界面上水解酯的酶。1834 年兔胰脂肪酶活性的报道至如今的微生物脂肪酶已有上百年的历史。微生物发酵法的应用前景要远远大于提取法及化学合成法。如今,黑曲霉、 白地霉、 毛霉等微生物来源的酶已制成结晶。根霉、 圆柱假丝酵母、 德氏根霉、 多球、 ,粘质色杆菌等也得到高度提纯, 并对它们的理化性质开展进一步研究。早在60年代, 假丝酵母、 曲霉、 根霉等菌产生的脂肪酶相继在日本进入商品生产。我国60 年代也已开展脂肪酶的研究开发[2]。从六十年代起,中国就开始把中科院微生物所筛选到解脂假丝酵母( Candida lipolytica)制成一种工业商品然后逐步投入市场进行使用. 脂肪酶不仅可以进行酯化,转酯 酯交换及合成等反应，在食品品质改良催化药物皮革生产可生物降解的无污染洗涤剂的研发和生物柴油的生产等方面脂肪酶更是有着不可替代的作用和应用潜质[3]. 脂肪酶的来源非常广泛,普遍地存在于动物植物和微生物中.据报道， 产脂肪酶的微生物有假单胞菌(Pseudomonas)荧光假单胞菌(P.fluorescens)枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)假丝酵母(Candida rugosa)根霉(Rhizopus)黑曲霉(Aspergillus niger)和青霉(Penicillium)等[4].微生物来源的脂肪酶一般是分泌性的胞外酶而不是胞内酶，很容易较高纯度的原酶， 适合于工业上大规模生产.然而工业用脂肪酶多来源于微生物。产脂肪酶的菌类主要有黑曲霉菌、荧光假单胞菌、白地霉无根根霉菌、毛霉圆柱假丝酵母菌、巢子须霉德氏根霉菌、多球菌绵毛状腐质霉菌、圆弧青霉黏质色杆菌。据统计，产脂肪酶的微生物有65 个属，其中细菌28 个属，放线菌4 个属，酵母菌10 个属，其它放线菌4个属、酵母菌10个属，其它真菌23个属。目前工业和实验室中使用的菌株多是通过在自然界中筛选得到高产的菌株然后进行定向和非定向改造得到高性能的