免疫组织化学技术操作流程.pdfVIP

免疫组化的流程 多聚赖氨酸溶液（Poly-L-Lysine Solution ） Cat.No.: SGP8920 Size: 10ml Conc.: 0.1% w/v, in water Storage: 18-26℃ Thimerosal, 0.01%, added as preservative 多聚赖氨酸溶液是广泛应用的组织切片与玻片黏合剂，该多聚阳离子分子与组织切片上的阴 离子相互作用会产生较强的黏合力。 适用组织学，免疫组织化学，冰冻切片，细胞涂片，原位杂交等使用的玻片的防脱片处理， 以防实验操作过程中组织掉片。也可用于细胞培养，增加细胞贴壁能力。 [使用说明] 免疫学 操作步骤（可直接在玻片上涂布） 1． 灭菌的 ddH2O 1:10 稀释该多聚赖氨酸溶液。 2 ． 用之前将稀释的多聚赖氨酸溶液放在室内，使其温度到室温 18-26℃ 3 ． 将玻片浸在稀释的多聚赖氨酸溶液 5 分钟。注意增加时间不会提高包被效果。 4 ．在60℃烘箱 1 小时干燥，或室温 18-26℃过夜干燥待用。 [注意] 1． 每 100mL 已稀释的多聚赖氨酸溶液要包被的玻片 40-90 张， 超过 90 张片子将影响其 黏合力。 2 ． 用之前的玻片必须保持清洁。必要时用含 1% HCl 的70% 乙醇溶液来清洗。 4 ． 释过的多聚赖氨酸溶液要放在 2-8 ℃，至少在 3 个月内是稳定的。 5 ． 用过的稀释液要过滤，若出现浑浊或长菌要丢弃。 [订货信息] ￥100 / 10ml 免疫组化操作规程 （一）、仪器设备 1 ）18cm 不锈钢高压锅或电炉或医用微波炉； 2 ）水浴锅 （二）、试剂 1 ）PBS 缓冲液（pH7.2～7.4 ）：NaCl 137mmol/L ，KCl 2.7mmol/L ，Na2HPO4 4.3mmol/L ， KH2PO4 1.4mmol/L 。 2 ）0.01mol/L 柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0 ，1000ml）：柠檬酸三钠 3g ，柠檬酸 0.4g 。 3 ）0.5mol/L EDTA 缓冲液（pH8.0 ）：700ml 水中溶解 186.1gEDTA·2H2O，用 10 mmol/L NaOH 调至 pH8.0,加水至 1000ml。 4 ）1mol/L 的TBS 缓冲液（pH8.0 ）：在 800ml 水中溶解 121gTris 碱，用 1N 的HCl 调至 pH8.0,加水至 1000ml。 5 ）酶消化液： a 、0.1%胰蛋白酶液：用 0.1%CaCl2(pH7.8) 配制。 b 、0.4% 胃蛋白酶液： 用 0.1N 的HCl 配制。 6 ）3% 甲醇-H2O2 溶液：用 30%H2O2 和 80% 甲醇溶液配制。 7 ）封裱剂： a 、甘油和 0.5mmol/L 碳酸盐缓冲液（pH9.0～9.5 ）等量混合； b 、油和 TBS(或 PBS)配制。 8 ）TBS/PBS pH9.0～9.5，适用于荧光显微镜标本；pH7.0～7.4 适合于光学显微镜标本。 （三）、操作流程 1 、脱蜡和水化 脱蜡前，应将组织芯片在室温中放置60分钟或60℃恒温箱中烘烤20分钟。 1 ）组织芯片置于二甲苯中浸泡10分钟，更换二甲苯后再浸泡10分钟； 2 ）无水乙醇中浸泡5分钟； 3 ）95%乙醇中浸泡5分钟； 4 ）70%乙醇中浸泡5分钟； 2、抗原修复 用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。 1 ）抗原热修复 （1）高压热修复 在沸水中加入EDTA （pH8.0 ）或0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0 ）。盖 上不锈钢高压锅的盖子，但不进行锁定。将玻片置于金属染色架上，缓慢加压，使玻片在缓 冲液中浸泡5分钟，然后将盖子锁定，小阀门将会升起来。10分钟后，去除热源，置入凉水 中，当小阀门沉下去后打开盖子。本方法适用于较难检测或核抗原的抗原修复。 （2 ）煮沸热修复 电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0 ）至95℃左右，放 入组织芯片加热10~15分钟。 （3 ）微波热修复 在微波炉里加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0 ）至沸腾后将组织芯片 放入，断电，间隔5~10分钟，反复1-2次。适用的抗原有：AR ，B