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第一章 流式细胞仪的结构和原理 第 1 节 流式细胞术发展史 纵观历史，几乎没有哪一门科学技术象流式细胞术这样凝结了众多不同学术背景、不同 科研领域科学家的心血。从流式细胞术的发明、改进、革新，到今天在各个领域应用的拓展， 每一步都是诸如生物学、生物技术、计算机科学、流体力学、激光技术、高等数学、临床医 学、分子生物学、有机化学和生物物理学等学科知识综合运用的结晶。现代流式细胞术更是 由于结合了单克隆抗体技术、定量细胞化学技术和定量荧光细胞化学，使其在生物学、临床 医学、药物学等等众多研究领域中的应用有了更加突飞猛进的发展。临床流式细胞术发展趋 势可归纳为：① 流式细胞仪从单纯大型仪器发展为适应各种实际应用的便携式、台式、高 分辨率、高质量分选的研究型流式细胞仪；② 对流式细胞术检测荧光参数，从采用荧光单 色、双色分析发展为多色分析，目前最多可同时检测 15 种荧光信号；③ 从检测参数的相 对定量发展为绝对定量；④ 从检测参数的手动人工分析发展为计算机软件的自动分析；⑤ 所采用的荧光试剂，从非配套试剂发展为配套的试剂盒试剂。而这一切，就要求我们流式细 胞仪使用者和科研人员一定要不断地有意识地学习上述各门学科知识，只有这样才能更好地 将流式细胞术应用到生物医学的临床实践和基础科学研究工作中去。 流式细胞术的发展简史： 1930 年 Caspersson 和 Thorell 开始致力于细胞的计数； 1934 年 Moldaven 是世界上最早设想使细胞检测自动化的人，他试图用光电仪记录流过一 根毛细管的细胞数量； 1936 年 Caspersson 等引入显微光度术； 1940 年 Coons 提出用结合了荧光素的抗体去标记细胞内的特定蛋白； 1947 年 Guclcer 运用层流和湍流原理研制烟雾微粒计数器； 1949 年 Wallace Coulter 提出在悬液中计数粒子的方法并获得专利； 1950 年 Caspersson 用显微分光光度计的方法在紫外线（UV ）和可见光光谱区检测细胞： 1953 年 Croslannd-Taylor 应用分层鞘流原理，成功地设计红细胞光学自动计数器； 1953 年 Parker 和 Horst 描述一种全血细胞计数器装置，成为流式细胞仪的雏形； 1954 年 Beirne 和 Hutcheon 发明光电粒子计数器； 1959 年 B 型 Coulter 计数器问世； 1965 年 Kamemtsky 等提出两个设想，一是用分光光计定量细胞成份；二是结合测量值对 细胞分类； 1967 年 Kamemtsky 和 Melamed 在 Moldaven 的方法基础上提出细胞分选的方法； 1969 年 Van Dilla，Fulwyler 及其同事们在 Los Alamos，NM(即现在的 National Flow Cytometry Resource Labs),发明第一台荧光检测细胞计； 1972 年 Herzenberg 研制出一个细胞分选器的改进型，能够检测出经荧光标记抗体染色的 细胞的较弱的荧光信号； 1975 年 Kochler 和 Milstein 提出了单克隆抗体技术，为细胞研究中大量的特异的免疫试剂 的应用奠定了基础。 从此，大量厂家不断研制生产出各具特色的流式细胞仪，流式细胞术进入了一个空前飞 速发展的时代。科学家们、仪器制造商们又纷纷将流式细胞仪的研究焦点转向染料的开发、 细胞的制备方法和为提高电子信号的处理能力上来。进入 21 世纪，流式细胞术作为一门生 1 物检测技术已经日臻完善，成为分析细胞学领域中无可替代的重要工具。 第 2 节 流式细胞仪结构和工作原理 流式细胞仪（Flow cytometry ,FCM ）是一种集激光技术、电子物理技术、光电测量技术、 电子计算机以及细胞荧光化学技术、单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。概括来说， 流式细胞术就是对于处在快速直线流动状态中的细胞或生物颗粒进行多参数、快速的定量分 析和分选的技术。从开始设想到第一台仪器问世，科技工作者们进行了不懈的努力，随着各 项相关技术的迅速发展，FCM 技术已经成为日益完善的细