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分子生物学新技术及应用 许芳 分子生物学新技术及应用 代谢组学及其研究进展 MicroRNA的研究及应用 第一节 代谢组学及其研究进展 什么是代谢组学？ 代谢组学研究方法 代谢组学分析技术 气相色谱-质谱联用技术（GC-MS） 液相色谱-质谱联用技术（LC-MS） 毛细管电泳-质谱联用技术（CE-MS） 核磁共振技术（NMR） 人类进入组学时代 转录组学 蛋白质组学 代谢组学 生命活动 生命活动需要物质与能量的产生与调节 什么是代谢组学？？ 代谢组学是通过考察生物体系（细胞、组织或生物体）受刺激或扰动后（如将某个特定的基因变异或环境变化后），其代谢产物的变化或其随时间的变化，来研究生物体系的一门科学 。 一、代谢组学的概念 组学时代 代谢组学研究什么？？ 生物体系（细胞、组织或生物体） 代谢产物发生变化（种类，随时间变化） 普遍定义 代谢组学：通过考察生物体系（细胞、组织或生物体）受刺激或扰动后（如将某个特定的基因变异或环境变化后），其代谢产物的变化或其随时间的变化，来研究生物体系的一门科学。 研究对象：相对分子质量小于1000的内源性小分子。 代谢物小分子类别：多肽、氨基酸及其衍生物、胺、脂类、金属离子。 代谢组学研究什么？？ 关注内源化合物 生物体系中的小分子化合物 疾病、毒性基因修饰、环境变化 疾病诊断、药物筛选 特点 1.关注于内源性小分子化合物。 2.对生物体系中的小分子化合物进行定性定量研究 3.内源性小分子化合物的上调和小调指示了与疾病、毒性、基因修饰或环境因子的影响。 4.内源性化合物的特点用来表征疾病和药物筛选。 研究对象： 组织： 体液： 研究方法 研究步骤： 应用： 药物研发 疾病研究 植物代谢组学 微生物代谢组学 中药现代化 代谢组学分析技术 气相色谱-质谱联用技术 液相色谱-质谱联用技术 毛细管电泳-质谱联用技术 核磁共振技术 代谢组学分析技术--气相色谱-质谱联用技术 代谢组学分析技术--气相色谱-质谱联用技术 分析技术 1.气相色谱-质谱联用技术（GC-MS） 工作原理： 代谢组学分析技术--气相色谱-质谱联用技术 代谢组学分析技术--气相色谱-质谱联用技术 代谢组学分析技术--气相色谱-质谱联用技术 代谢组学分析技术--气相色谱-质谱联用技术 几种新的GC-MS技术 全二维气相色谱质谱技术（GC×GC-TOFMS） 全二维气相色谱： 柠檬水中柠檬烯的手性化合物分析 研究实例： 代谢组学分析技术—液相色谱-质谱联用技术 2.液相色谱-质谱联用技术（GC-MS） 工作原理： 液相色谱-质谱联用的新技术 4000Q Trap LC/MS/MS 代谢组学分析技术—液相色谱-质谱联用技术 应用实例：Yang Jun 等运用安捷伦公司的高效液相色谱系统配合API公司的Q-TRAPLC液相质谱系统。研究50个健康人和慢性乙肝病人的血清样本，经过脱蛋白处理。经过去噪音，峰型尖锐化等处理。使用PLS-DA处理代谢数据，研究确定了代谢物标记分子。 Yang Jun 等运用安捷伦公司的高效液相色谱系统配合API公司的Q-TRAPLC液相质谱系统。研究50个健康人和慢性乙肝病人的血清样本，经过脱蛋白处理。经过去噪音，峰型尖锐化等处理。使用PLS-DA处理代谢数据，研究确定了代谢物标记分子。（Journal of Proteome Research, 2006, 5, 554-561）下图为分析结果： 代谢组学分析技术—液相色谱-质谱联用技术 适用于短时间内选定靶标化合物的检测 发展： 代谢物靶标分析 轮廓分析 代谢物的结构解析 代谢组学分析技术—液相色谱-质谱联用技术 超高速液相色谱： UPLC-MS 新型液相色谱技术UPLC 比较（a）HPLC和（b）UPLC用于美沙芬的代谢物TOP质谱全扫描（Rapid Commun Mass Spectrom, 2005, 19, 843） UPLC在代谢组学中的研究优势： UPLC相对于传统的HPLC有更好的分离效率、峰容量、及灵敏度，提供更适合与质谱联用的接口，有助于检出更多的代谢物。 提高方法通量、灵敏度，改善与质谱联用的定性定量结果。 UPLC与质谱联用为代谢组学研究提供更加高效、灵敏的研究平台。 毛细管电泳-质谱联用技术（CE-MS） 代谢组学研究的生物样品中包含多种离子性代谢物（糖酵解代谢产物、三羧酸循环代谢物、如羧酸、磷酸化糖；以及核苷酸、氨基酸、辅酶等代谢物。） 毛细管电泳以毛细管为分离通道、采用高压直流电场为驱动力的的新型液相分离技术，通过离子化合物的质荷比（m/z）不同造成迁移速率不同来实现分离。 适用于普通反相