遗传学实验指导书.docVIP

实验1 植物染色体减数分裂观察 1、实验目的 通过对植物花粉的形成过程中减数分裂的观察，了解植物生殖细胞形成的一般过程以及染色体在这一过程中的动态变化，从而深刻理解减数分裂的遗传学意义，为研究遗传学基本规律奠定细胞学基础。 2、实验原理 减数分裂是一种特殊方式的细胞分裂，仅在配子形成过程中发生。这一过程的特点是：细胞连续两次进行核分裂，而染色体只复制一次，结果形成四个核，每个核只含单倍数的染色体。即染色体数减少一半，所以称为减数分裂。另一个特点是前期特别长。而且变化复杂，包括同源染色体的配对和非姊妹染色单体的交换与分离等。 3、实验材料 高粱（2n=20）、玉米（2n=20）或小麦（2n=42）等雄蕊幼穗及其永久制片和照片。 4、实验器具和药品 用具：显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、接种针、镊子、酒精灯、吸水纸、擦镜纸、烧杯、量筒、带橡皮头的铅笔。 药品：纯酒精、95%酒精、冰醋酸、70%酒精、卡诺固定液（Carnoy）液、醋酸洋红（醋酸地衣红）。 5、实验说明 在被子植物中，由分生细胞进行几次有丝分裂，形成小孢子母细胞（花粉母细胞），简称PMC，每个PMC进行两次连续的细胞分裂，即减数分裂，产生四个子细胞，每个子细胞就是一个小孢子，每个小孢子内的染色体的数目是PMC的一半（n）。整个减数分裂过程可分为下列各个时期： 第一次分裂： 前期I：又可分为以下五个时期： 细线期：核内出现染色体细长如线，数目成双，核仁明显，但一般看不到双线结构。 偶线期：同源染色体配对，即联会。呈二价状态（此期很短暂，不易找到）。 粗线期：二价体变粗变短，由于各染色体由已复制成两条的染色单体组成。故此时配对的染色体含有四条染色单体，叫做四合体。 双线期：各同源染色体开始分开，由于在粗线期非姊妹染色体之间发生局部的交换，因而同源染色体在一定区段出现交叉结。 终变期：染色体长度更为粗短，交叉结向端部移动，核仁的核膜开始消失，此时观察染色体最清楚，故可计算数目。 中期I：染色体排列在赤道板上，并出现纺锤丝。 后期I：同源染色体由于纺锤丝牵引着丝粒，分别向两极移动。由于各染色体的着丝粒没有分裂，故两个细胞只有半数染色体（n）。 末期I：染色体拉向两极，松开变细，形成两个子核，细胞质分裂，在中央由纺锤丝形成细胞板，产生二分体。 第二次分裂： 前期Ⅱ：染色体又开始缩短，而其包含的两条染色单体分得很开，但着丝粒仍然连在一起。 中期Ⅱ：每个染色体整齐地排列在各个分裂细胞的赤道板上。 后期Ⅱ：每个染色体的着丝粒分裂为二，姊妹染色体分别移向两极。 末期Ⅱ：每个分裂细胞的细胞质又分隔为二，形成四个子细胞，又叫四分体。 6、实验步骤 （1）试剂的配制 卡诺固定液：纯酒精：冰醋酸 = 3：1 卡宝品红：①原液A：称取8克碱性品红结晶溶于100毫升70%乙醇中（可以无限期保存） ②原液B：取100毫升原液A 加入到90毫升5%的苯酚水溶液中，充分混匀，置37℃温箱中温溶2-4小时（此液不稳定，2周内使用） ③原液C：取原液B55毫升，加入冰乙酸和甲醛各6毫升，充分混匀。 ④染色液：取原液C10-20毫升，加入90-80毫升45%乙酸和1克山梨醇（Sorbitol）。 该染色液配好后为淡品红色，立即使用染色较淡，放置两周后染色能力明显加强，而且放置时间越久染色能力越强，可以在常温下存放两年。 醋酸洋红：先将100毫升45%的乙酸装入大约200毫升的短颈平底烧瓶中加热煮沸，移去火源，然后，缓缓加入1克洋红粉末，并不断搅动使其溶解，这一过程防止溅出完全溶解后，重新置火上加热煮沸1-2分钟，此时，可用细线悬一生锈的小铁钉浸入染色液中约1分钟后取出或加入氢氧化铁的50%的乙酸饱和液1-2滴，不可多加，以免产生沉淀，配置完毕在室温下静置12小时后过滤于棕色试剂瓶中，备用。 （2）取材：玉米一般在雄穗抽出数天前开始取样，取材时用手指由喇叭口向下挤捏叶鞘，感到松软则是花序部位，用刀片纵切一刀，用镊子取出数条花序检查，如先端小穗长3-4cm时，花药未变黄的花序下处于减数分裂期，采样放入固定液中固定备用。高粱是在孕穗期，旗叶叶环与倒二叶叶环4-10cm时取样。高粱和玉米的最佳取样时间是晴天的上午8-10时。 （3）制片：在洁净的载玻片上，用清洁解剖针或刀片压在小花基部向一端挤出花药2-3枚，再将花药纵切数片，涂成薄片，然后加一滴醋酸洋红染液。也可在花药上滴上染液，然后用镊子把花药镊碎。上述两种方法都要去掉肉眼可看到的残渣，数分钟后盖上盖玻片，将吸水纸放于盖玻片上固定盖玻片，用大拇指匀力压片。为加深染色，可微微加热。 （4）镜检：先在低倍镜下寻找花粉母细胞，一般花粉母细胞较大，园或扁园形，细胞核大着色浅。而一些形状较小而整齐一致着色深的细胞则是花