龙葵碱诱导HepG2细胞凋亡的NAT1酶机制研究.docVIP

  龙葵碱诱导 HepG2 细胞凋亡的 NAT1 酶机 制研究# 高世勇，苏怡君，季宇彬* 5 10 15 （哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，哈尔滨 150076） 摘要：目的 探讨龙葵碱诱导 HepG2 细胞凋亡的 NAT1 酶机制。方法 采用高效液相色谱法 （HPLC），以对氨基苯甲酸（PABA）为底物，以 PABA 被 NAT1 乙酰化为乙酰对氨基苯甲酸 （Ac-PABA）的量反应 NAT1 酶的活性。观察不同浓度、不同时间龙葵碱对完整 HepG2 细胞 NAT1 酶活性的影响；龙葵碱对 HepG2 细胞细胞质中 NAT1 酶活性的影响；通过改变底物 PABA 浓度，采用双倒数作图法，以底物 PABA 浓度的倒数（1/S）对 NAT1 反应速率的倒数（1/V） 作直线，得出回归方程，计算 Km 和 Vmax。结果 在 NAT1 酶活性测定中，龙葵碱能显著降 低 HepG2 完整细胞 NAT1 的活性；龙葵碱能够降低 HepG2 细胞质内 NAT1 的活性；随着作用时 间的增加 Ac-PABA 生成的量逐渐增加，但在相同作用时间段龙葵碱能显著降低 Ac-PABA 生成 的量。动力学研究表明，以 PABA 为底物，对于 HepG2 完整细胞，阴性对照组的米氏常数（Km） -3 -5 - 1 -4 -6 - 1 -3 -5 · L - 1 -4 -6 - 1 -1 -1 -4 - 1 -3 -6 - 1 -1 -1 -4 - 1 和(2.22 20 -3 -6 - 1 -1 对照组和龙葵碱组的 Km 没有差异，而 Vmax 差异显著。结论 龙葵碱是 HepG2 细胞 NAT1 酶的非竞争性抑制剂。龙葵碱通过作用于 NAT1 与 PABA 结合位点以外的其它位点抑制 NAT1 酶的活性而诱导 HepG2 细胞凋亡。 关键词：龙葵碱；HepG2 人肝癌细胞；NAT1 酶 25 30 中图分类号：R965 Study of Solanine on N-acetyltransferase 1 Activity by Which Induce Apoptosis in HepG2 Cell Gao Shiyong, Su Yijun, Ji Yubin (Research Center of Life Sciences and Environmental Sciences, Harbin University of Commerce, Harbin 150076) Abstract: Objective To explore the relationship between N-acetyltransferase1 activity and apoptosis inducing by solanine in HepG2 cell. Methods Employing HPLC, using PABA as sub strate, taking concentration of PABA as concentration of substrate, in intact HepG2 cells and their 35 40 45 cytoplasm, taking the speed of PABA being acetylated to Ac-PABA by NAT1 as the activity of NAT1. Investigating the effect of different concentrations or time of solanine on the intact HepG2 cell or cytoplasm. Using double reciprocal plot, taking 1/S(the reciprocal of concentration of PABA) and 1/V(the reciprocal of reaction rate of NATase) as coordinates, regression equation was obtanined, and Km and Vmax were caculated. Results The results show that solanin