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免疫比浊分析 目的:掌握免疫透射比浊的原理、基本操作方法及其在临床上的应用。 原理 抗原浓度与浊度的关系: ΔA Δ A0 C c0 试剂与器材 1.待检人血清 2.人IgG标准液( 6g/L 、12g/L、20g/L、30g/L) 3.羊抗人IgG诊断血清 4.缓冲液(含PEG) 5.加样器、试管、水浴箱、分光光度计等 操作方法 1.生理盐水稀释待测样本和标准液(1:10)? 2.按下表操作 加入物 空白管(μl) 标准管(μl) 样品管(μl) 缓冲液 2250 2250 2250 生理盐水 30 —— —— 标准品(稀释后?) —— 30 —— 待测样本 (稀释后?) —— —— 30 混匀,37℃5min,600nm,空白管调零,读取各管吸光度值A1 抗IgG 750 750 750 混匀,37℃孵育5min后,在波长为600nm处测定,以空白管调零,读取各管吸光度值A2,ΔA=A2-A1 结果计算 以标准品各管的ΔA为横坐标,以对应标准品浓度为纵坐标,绘制标准曲线。依据样品管的ΔA在标准曲线上查出待测浓度。 注意事项 1.待检血清无溶血,稀释时必须准确。 2.检测时反应体系保持抗体过量。 3.当IgG浓度超过30g/L时,应将样品用生理盐水稀释后再测定,测得的结果乘以稀释倍数。 4.检测用抗体应亲和力高,特异性好,R型抗体。 5.试剂中含有叠氮钠,操作时注意不要接触皮肤或粘膜。
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