荧光免疫标记技术.ppt

间接免疫荧光法示意图 讨论分析 荧光免疫显微技术在医学检验中的应用： 细菌检验---细菌培养物、感染组织、病人分泌排泄物等（菌种鉴定） 病毒检验---特殊意义 亦可检测血清中Ab(间接法)---流行病学调查和临床回顾性诊断 寄生虫检验---间接法测Ab,如抗疟Ab 、阿米巴Ab等 自身Ab检测 讨论分析 配分与评分标准 序号 考核要点 分值 评分标准 得分 1 2 抗原基质片，平衡至室温 (2) 记号笔画圈标记 待检血清和对照血清用PBS作1∶10稀释 (2) 微量加样器50μl待检血清或对照血清于基质片上 ⑶ 水平置于湿盒中37oC温箱反应30min 1 1 1 1 1 不符合要求将此分扣除 不符合要求将此分扣除 考核 配分与评分标准 序号 考核要点 分值 评分标准 得分 3 ⑴ 以PBS冲洗抗原基质片 (2) 浸于盛有PBS染 色缸中 ⑶ 反复漂洗3次 ⑷ 每次5min 1 1 1 不符合要求将此分扣除 考核 配分与评分标准 序号 考核要点 分值 评分标准 得分 4 ⑴ 取出玻片，吹干 (2) 加50μl最适工作浓度的标记抗体 ⑶ 平置于湿盒内，37oC温箱反应30min 1 1 1 不符合要求将此分扣除 考核 序号 考核要点 分值 评分标准 得分 5 6 ⑴ 重复步骤3，洗去未结合的荧光抗体 (1) 滴加缓冲甘油封片 ⑵ 用荧光显微镜观察 1 1 1 1 不符合要求将此分扣除 不符合要求将此分扣除 考核 配分与评分标准 姓名、班级和学号 实验题目 实验原理（略写） 实验操作（略写） 实验结果 画图 文字描述 分析和讨论 思考题 实验报告 任务八荧光免疫标记技术 知识目标 技能目标 素质目标 1.重点掌握免疫荧光显微技术、免疫荧光技术在医学检验中的应用 2.熟悉荧光的基础知识、荧光免疫分析常用仪器和设备 3.了解荧光抗体的制备 1.会使用荧光显微镜等常用仪器和设备 2.会用荧光免疫技术检测抗原抗体 3.能将荧光免疫测定与临床应用相联系 通过学生相互鼓励、严谨、认真操作，各小组共同协作完成任务，培养了与人合作、与人沟通的能力 任务目标 1 荧光标记物的制备 　 2 荧光免疫组织化学技术 3 其他荧光免疫技术 任务对象 任务过程 复习提问 案例导入 讲解与示教 学生操作 讨论分析 评价、考核 课后思考题 教 学 环 节 2′ 30′ 2′ 10′ 40′ 5′ 1′ 患儿，男，间断发热五天，伴咳嗽3天。体温最高39度，病程第2天查血常规正常，诊断“呼吸道感染”并静滴“阿奇霉素”3天，无明显改变，即而出现咳嗽，为阵发性刺激性咳嗽，少痰，胸片提示：双肺纹理增粗，右上肺片影。复查血常规仍正常。患儿肺部感染系哪种病原体所致？ 如何快速诊断？ 案例导入 老师纠正 点评 学生操作 一位学生 操作演示 学生分组 再操作 【主要试剂与器材】 1.抗原基质片 固定有核抗原，可采用小鼠肝组织切 片或印片经丙酮固定即可。目前有商品化试剂供应。 2.标记抗体 FITC标记的羊抗人IgG，有商品化试剂供 应。临用时稀释至工作浓度。 3.0.01mol/L pH7.2PBS。 4.缓冲甘油 9份甘油和1份PBS混匀。 5.待检血清，阴性、阳性对照血清。 6.其它 荧光显微镜、染色缸、吸管、微量加样器等。 实验操作 【操作方法】 1.自冰箱中取出抗原基质片，平衡至室温，用记号笔画圈标记。 2.将待检血清和对照血清用PBS作1∶10稀释，用微量加样器加50μl待检血清或对照血清于基质片上，水平置于湿盒中37oC温箱反应30min。 3.以PBS冲洗抗原基质片，再分别浸于盛有PBS染色缸中，反复漂洗3次，每次5min。 4.取出玻片，吹干，加50μl最适工作浓度的标记抗体，平置于湿盒内，37oC温箱反应30min。 5.重复步骤3，洗去未结合的荧光抗体。 6.滴加缓冲甘油封片，用荧光显微镜观察。 实验操作 【结果判断】 1.荧光显微镜下见肝细胞核呈黄绿色，为阳性；反之为阴性。 2.根据荧光分布情况，可分为四种荧光核型： ⑴均质型:细胞核呈均匀一致的荧光。 ⑵周边型:细胞核周围呈现荧光，核中央染色弱或无荧光。 ⑶斑点型：细胞核呈现斑点状荧光。 ⑷核仁型：核仁部分呈现荧光。 实验操作 实验操作 【注意事项】 1.滴加的血清或标记抗体应充分覆盖满抗原片。样品之间防止交叉污染。反应时应置于湿盒内，防止干燥。 2.每次冲片应彻底，防止非特异荧光