病理学实验 免疫组化.pptVIP

免疫组织化学技术 免疫组织化学的基本原理 用标记物或显色物标记的抗体或抗原，通过免疫组织化学中的抗原抗体反应来检测组织或细胞内的抗原成分 免疫组织化学超敏SP试剂盒组成 试剂A：内源性过氧化物酶阻断剂（无色） 试剂B：正常非免疫动物血清（蓝色） 试剂C：生物素标记的第二抗体（黄色） 试剂D：链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶 （红色） DAB试剂盒 试剂A：DAB缓冲液 试剂B：DAB底物 试剂C：DAB显色剂 免疫组化染色步骤 1. 脱蜡、水化，PBS×3，3×3分钟 说明：二甲苯15min、二甲苯15min、95％乙醇3min、80％乙醇3min、70％乙醇3min、自来水冲洗，蒸馏水3min 2.根据每一种抗体的要求，对组织抗原进行相应的修复 3. 滴50μl过氧化物酶阻断溶液（试剂A），37℃10分钟，PBS×3，3×3分钟 说明：目的是阻断内源性过氧化物酶活性 4.滴50μl正常非免疫动物血清（试剂B），37℃孵育10分钟 说明：目的是封闭组织中含有的内源性生物素，减轻非特异性染色 5. 滴50μl的第一抗体（ER或cerb-B2抗体），37℃孵育1小时 说明：抗体与组织中的抗原充分结合 6.PBS×3。滴50μl生物素标记的第二抗体（试剂C），37℃孵育10分钟，PBS×3 7. 滴50μl链霉菌抗生物素－过氧化物酶溶