膜蛋白结晶方法学研究进展.pdfVIP

Reviews and Monographs 综述与专论 生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biophysics 2012, 39(2): 126~136 膜蛋白结晶方法学研究进展* 呼延霆 张辰艳 马晓亮 尹大川** (西北工业大学生命学院，空间生物实验模拟技术国防重点学科实验室，西安710072) 摘要 膜蛋白执行着物质运输、能量转换和信号转导等重要生物学功能，其分子的三维结构解析对阐述其功能及开展理性药 物设计有着十分重要的意义． 目前膜蛋白结构解析以X 射线单晶衍射技术为主，该技术需要高质量晶体作为衍射对象．然 而由于膜蛋白具有两亲性，难以得到高度有序的三维晶体，进而导致其结构解析十分困难．针对此问题，研究者们发展了一 些专门面向膜蛋白的结晶方法，如基于去垢剂的方法，基于脂类的方法等．本文回顾了这些方法，并对未来膜蛋白的结晶研 究进行了展望． 关键词 膜蛋白，结晶方法，去垢剂，脂立方相 学科分类号 1801450 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2011.00235 膜蛋白是生物膜功能的主要执行者之一，所有 度有序的三维晶体，从而给膜蛋白的结构解析带来 [4] 的细胞和细胞器都由疏水的脂双分子层包裹，膜蛋 巨大的障碍 ．因此，如何得到稳定并且堆积有序 白与双层脂膜结合或镶嵌在脂膜中，主要承担着物 的膜蛋白晶体是膜蛋白结晶研究的核心问题．本文 质运输、能量转换和信号转导等重要功能，而且至 对膜蛋白结晶方法学中发展出的技术及其近年来的 [1-2] 少有40% 小分子药物的靶标是膜蛋白 ，它与许 新进展进行了回顾，并展望了未来膜蛋白结晶的研 多疾病都密切相关，因此膜蛋白的结构解析对膜蛋 究方向． 白功能研究和药物设计均有十分重要的意义． 目 1 膜蛋白结晶方法学原理 前，解析膜蛋白分子三维结构主要的方法是X 射 线单晶衍射技术．对该技术而言，高质量的膜蛋白 膜蛋白结构的特殊性，使其一旦脱离天然磷脂 晶体是衍射的基础，因此如何获得高质量晶体是研 双分子结构就会发生聚集变性，导致其三维结构改 究膜蛋白结构的关键环节之一． 自1985 年Michel, 变和功能的丧失．因此，要保证膜蛋白的结晶，首 [3] 先必须找到一种能够高效地从天然环境中提取膜蛋 Huber 和Deisenhofer 等 得到了第一个膜蛋白结构 之后，解析出的膜蛋白结构数量逐年增加．尽管如 白并能稳定其结构功能的方法．使用两亲性分子诸 此，PDB 数据库中的73 338 个结构(截止2011 年5 如去垢剂、脂类分子是目前最主要的手段，其中去 月31 日) 中，膜蛋白结构仅占约1%(812 个) ，其中 垢剂应用最为广泛，但近年来脂类分子也逐渐受到 只有290 个结构属于特异折叠的膜蛋白结构．由此 了研究者越来越广泛的关注． 可见，膜蛋白结构解析仍然是生命科学领域中极具 1.1 两亲性分子自组装原理 挑战性的难题，而构成此难题的重要原因之一是膜 两亲性分子的亲水基与疏水基与水有相反的作 蛋白的结晶存在很大的困难． 获得高质量的膜蛋白晶体缘何如此困难？膜蛋 白分子具有两亲性，疏水部分靠近膜内，亲水部分 * 国家重点基础研究发展计划(973)(2011CB710905)和西北工业大学 博士论文创新基金(CX201023)资助项目. 暴露在膜外，这种既亲脂又亲水的结构使得它们只 ** 通讯联系人