化学生物学课程论文--蛋白质组学中分离与检测技术与应用研究.docVIP

化学生物学专题课程论文 专 业：姓 名：学 号： 蛋白质组学 摘要：蛋白质组学是在后基因组时代出现的一个新的研究领域本文概括了蛋白质组学的概念和研究内容，以及近年来蛋白质组学 关键词：蛋白质组学；分离技术；检测；应用 蛋白质是生命的物质基础，是生命活动的最终控制者和直接执行者，它参与生物体内几乎所有的生命活动过程，如生长、发育、遗传、代谢、应激、能量转换、信号传导等。随着后基因组时代( post-genome era )的到来，生命学科的研究重心从揭示遗传信息的结构基因组学转移到在整体水平上对生物功能研究的功能基因组学上来[1]，蛋白质组学成为研究的新热点之一。蛋白质组学最基本的目的就是定性和定量地鉴定一个细胞或组织中的全部蛋白质[2]，而现代分离技术，尤其是电泳、生物质谱、蛋白质芯片及相关数据分析工具的发展更是推动着整个蛋白质组学的向前发展，对人们研究和揭示生命活动（如生长、发育和代谢调控等）的规律，探讨重大疾病的机理、疾病诊断、疾病防治和新药开发将提供重要和有力的手段。 1蛋白质组学概念及研究内容 蛋白质组(proteome)最早是由澳大利亚的Wilkins和Williams于1994年提出首次在《Electrophoresis》上发表[]。其概念定义为由一个细胞或一个组织的基因组所表达的全部相应的蛋白质，也可以说是细胞、组织或机体全部蛋白质的存在及其活动方式。根据蛋白质组时空性和可调节性的特点可将其理解为在特定时刻、特定环境和实验条件下基因组所表达的全部蛋白质[]。 随着蛋白质组的提出人们进入了一个全新领域—蛋白质组学(Proteomics)。蛋白质组学作为一门新兴学科，不同于传统的蛋白质学科之处在于它是将蛋白质组作为研究对象从整体上研究蛋白质的组成与调控的活动规律蛋白质组学研究的对象无任何限制，包括单细胞真核生物(如酵母)、原核微生物(如支原体)、多细胞真核生物(如人类正常组织或病理组织)等多种样品[]。 根据研究目的蛋白质组学可分为表达蛋白质组学、功能蛋白质组学、转录后加工蛋白质组学、结构蛋白质组学[]。 1.3 蛋白质组学的研究内容 目前蛋白质组学的研究内容：对蛋白质的识别和定量化，确定其在细胞内外的定位、修饰、相互反应、活性，并最终确定蛋白质的功能概括结构蛋白质组学和功能蛋白质组学两方面[]。 蛋白质组学的核心在于通过对蛋白质进行大规模地综合分析精细、准确地阐明生物体全部蛋白质的表达模式及功能模式[]。具体包括对某种物种、个体、器官、组织或细胞的全部蛋白质性质(包括表达水平、功能、翻译后修饰、蛋白质与蛋白质的相互作用、蛋白质与疾病的关联性等)进行分析 2 蛋白质组学技术 蛋白质组学对蛋白质进行分离和鉴定常用技术主要包括电泳双向凝胶 2-DE、毛细管电泳、差相凝胶电泳等)、质谱MS）和生物信息学三大核心技术[]，除此之外还有蛋白质芯片、翻译后的修饰技术等[]。其中双向凝胶电泳和质谱是现阶段分离鉴定蛋白质的两大技术支柱。）） 双向凝胶电泳( Two-dimensional gel electrophoresis，2-DE)是于1975年建立起来的在蛋白质组研究中起极其重要作用的蛋白质分离技术，是分离高度复杂的蛋白质混合物最有效的方法之一。其基本原理[2]：一是基于蛋白质的等电点不同在pH 梯度胶内等电聚焦( Isoelectric focusing) 进行第一次分离；二是转90°再根据分子量的大小进行SDS-聚丙烯酰胺凝胶电 泳（SDS）中进行第二次分离，这样复杂蛋白质混合物中的蛋白质在二维平面上就可被分开。一般采用垂直电泳或水平电泳，两种方法的试验结果没有明显差别，均适用于分子质量为10～150 kD的蛋白质。 经2DE分离后，通常对凝胶上的蛋白质可以切割分离纯化，并对分离后的蛋白质斑点进行染色检测。凝胶染色传统的方法有考马斯亮蓝染色、同位素自显影和银染外等。目前发展了胶体考马斯亮蓝染色，胶体银染、锌染、负染和荧光染色技术，这些技术具有检测灵敏度高(可达ng级)，操作简单、安全，对环境污染小，染色背景低，与质谱鉴定相匹配等特点[10]。随着图像分析系统的发展，其中荧光染色技术更多的应用于定量蛋白质组研究，而扫描染色的电泳图经计算机处理，可得到相应样品的2DE电泳图谱，并可获取在相应生理或病理生理条件下发生改变的蛋白质的信息。 双向凝胶电泳最常用的蛋白质分离方法，它可以迅速地从样本中获取整个蛋白质组变化的宏观信息该方法具有分离能力好，分辨率高，高通量等优点[12]但仍存在很多不足，如蛋白质分离的自动化水平不高 2.1.2 差异凝胶电泳技术 差异凝胶电泳（Difference gel electrophoresis，DIGE））DIGE技术是双向电泳技术的新发展，它最大的优点是通过在同一