碱性品红荧光法测定脱氧核糖核酸及其机理的研究.pdfVIP

第4 卷 分析化学 （RS*8T NU+8US ）! 研究简报 第 期 ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! ! 4$$3 年 月 ;HE:FDF V6WC:@? 6X +:@?E=@? ;HF.EDC %4A - %4 碱性品红荧光法测定脱氧核糖核酸及其机理的研究 # 俞! 英 ! 吴! 霖! 谭丽贤 （华南师范大学化学系，广州#$%#） 摘! 要! 以三苯甲烷类阳离子染料碱性品红（’( ）为荧光探针建立脱氧核糖核酸（)*+ ）的定量分析方法。 在近中性范围内碱性品红与)*+ 有较强的结合，生成复合物的荧光强度与)*+ 的量呈线性上升关系；线性 响应范围为$ , $ - , $ ./0 (（! 1 $ , 22$3 ），检出限2 !/0 ( 。方法用于样品中)*+ 含量的测定，取得满意的 结果；对作用机理进行了探讨，认为’( 与)*+ 相互作用存在插入结合形式。 关键词! 荧光分析法，碱性品红，脱氧核糖核酸 ! 引 言 随着现代分子生物学和分子生物技术的发展，生物体内重要的遗传物质)*+ 一直是人们研究的热 点。由于)*+ 本身无明显的荧光，所以需寻求)*+ 的外部探针。溴化乙锭方法的提出受到人们的关 注，但由于它具有强烈的致癌性，使其应用受到很大的限制。目前有机小分子与)*+ 作用的荧光法及 ［#］ 分光光度法研究较多，如吩嗪染料中性红嵌插于)*+ 碱基对中 ，且插入后的中性红荧光量子产率大 大增加［4 ］，基于此可用于)*+ 的定量分析；结晶紫与)*+ 作用具有的减色效应而建立的分光光度法测 定)*+［ ］；吖啶橙5藏红9 体系两者均可插入)*+ 分子中，利用荧光猝灭来测定)*+［3 ］。本实验报道 在中性溶液中，碱性品红（’( ）与)*+ 作用产生的荧光发射光谱变化，不仅荧光强度随着)*+ 量的增 加而增强，而且荧光峰紫移近4$ :. ，以此建立了)*+ 的测定方法，优化了实验条件、进行了干扰实验， 并用于样品的分析，对’(5)*+ 体系的作用机理进行了探讨。 # 实验部分 # , ! 仪器与试剂 2%$;’9 荧光分光光度计（上海精密科学有限公司分析仪器总厂）。脱氧核糖核酸（简称)*+ ，上海 长阳制药厂）；酵母核糖核酸（’*+ ，上海伯奥生物科技有限公司）；小牛胸腺)*+ （=)*+ ，北京百泰生 化技术公司）：均用$ , $ .6?0 ( *@;? 分别配制成浓度为%%$ 、#2A 和#2A /0 ( 的储备液于# - 3 B 冰箱中 保存；5酪氨酸（59C6DE:F ）、5色氨酸（59CG6GH@:F ）均为上海伯奥生物科技有限公司产品；#苯丙氨 酸（5IHF:?@?@:E:F ，上海源聚生物科技有限公司）；碱性品红（’6D@:E?E:F ，’( ，天津市科密欧化学试剂 开发中心）的储备液为4 , 2% J #$ K 3 .6?0 ( ，使用时稀释为4 , 2% J #$ K % .6?0 ( ；LCE6:5’6ME:D6: 系列缓冲 溶液；9CED5N;? 缓冲溶液；其它试剂均为分析纯，实验用水均为二次去离子水。 # , # 实验方法 在一系列#$ .( 比色管中分别加入一定量的’( 、缓冲溶液和)*+ ，以水定容，摇匀，静置 # .E: 后，以 1 % :. 激发，在 1 3$ - %$ :. 光谱扫描或在 为$3 , P :. 处测定试剂空白与结合反 FO F. F. 应体系的荧光强度，并求出#$ 。 $ 结果与讨论 $ , ! 碱性品红的荧光光谱 ’( 是一种三苯甲烷阳离子染料，图# 是它的荧光光谱图。实验发现在广泛的缓冲溶液 LCE6:5 ’6ME:D6