超高分辨率荧光显微镜的应用1光学显微镜的出现及其影响.pdfVIP

二 超高分辨率荧光显微镜的应用 超高分辨率荧光显微镜正在不断改变我们对细胞内部结构及运作的认识。不过在现阶段，显微镜技术还是存 在着种种不足，如果人们希望显微镜能在生物研究领域发挥重要作用，就必须对其加以改进和提高。 1 光学显微镜的出现及其影响 自荷兰博物学家、显微镜创制者A n t o n i e v a n Le e uw e n ho e k （16 3 2 - 17 2 3 ）在17 世纪第一次将光 线通过透镜聚焦制成光学显微镜并用它观察微生物 （microorganisms or animalcule ）以来，显微镜就一直 是生物学家从事研究工作、探寻生命奥秘必不可少的利 器。正是因为有了Leeuwenhoek的这项伟大发明及其后 继者对显微镜技术的不断改进和发展，人们才能够对细 胞内部错综复杂的亚细胞器等结构的形态有了初步的了 解。 此后，研究人员对显微镜技术的追求从未停歇过， 他们总是希望能得到分辨率更高的显微镜，从而更好 地观察细胞内部更细微的结构。最近， 《自然-方法》 图片说明：Leeuwenhoek和他发明的第一 Nature Methods ）杂志上报道的超高分辨率成像技术 （ 代显微镜 （上图）；最新一代的SR PALM 成像系统 （下图）。 （super-resolution imaging, SR imaging ）终于使得人 们可以在单分子水平上进行观察研究。 图片来源：Lippincott-Schwartz Lab 2 SR技术的发展过程 在达到今天SR技术水平的过程中，承载了许许多多研究人员辛勤劳动的汗水，也面临着诸多亟待解决 的难题。 在以上这些光学SR成像技术中有两种技术—— 受激发射减损显微镜 （stimulated emission depletion microscopy, STED）和饱和结构光学显微镜 （saturated structured illumination microscopy ，SSIM）最受 关注。 99 生生命命奥奥秘秘wwwwww..lliiffeeoommiiccss..ccoomm 最近，基于探针SR成像技术的光敏定位显微镜 （PA LM ）和随机光学重建显微镜 （STORM ），以及借 助荧光基团随机激活特性的荧光光敏定位显微镜 （FPALM）都已经取得了成功。 通过基于探针的SR成像技术，可以获得多张原始图像。在每一张原始图像中，细胞内只有一部分被荧 光标记的分子能发出荧光，即这些荧光分子都处于不断激活和灭活的交替状态，每一次都只有部分分子能被 观察并成像。而且由于每次发出荧光的分子都分散得较为稀疏，因此相互之间不会受到影响，也就避免了因 相邻分子发出荧光而无法分辨的问题。最后将这些原始图片叠加、重合在一起就得到了最终的高分辨率图 像。这样，就能使得那些以前由于荧光点太密以至于无法成像的结构的分辨率达到纳米级水平，而且成像的 5 2