鲢鱼、鳙鱼、草鱼谷胱甘肽过氧化物酶基因的克隆及组织表达研究.pdfVIP

鲢鱼、鳙鱼、草鱼谷胱甘肽过氧化物酶基因的克隆及组织表达研究 摘要 GPX 是一个多酶家族的统称，其中一部分酶有依赖硒的谷胱甘肽过氧化物 酶活性并含有独特的UGA 编码的硒代半胱氨酸(selenocysteine SeC)，简称 Se-GPx 。本研究利用RT-PCR技术分别从淡水食毒藻鱼类鲢鱼 (Hypophthalmichthysmolitrix)、鳙鱼(Aristichthys nobilis )及草食性鱼类草鱼 (Ctenopharyngodonidella)肝脏扩增出谷胱甘肽过氧化物酶 （GPX ）cDNA 核 心序列。序列分析表明鲢鱼、鳙鱼、草鱼GPX 基因的cDNA 核心序列均为263bp 。 进一步采用RACE 法与基因组步行法，克隆鲢鱼、鳙鱼、草鱼GPx 基因3’端 序列、鲢鱼GPX 基因5’端序列及5’侧翼序列, 通过序列拼接得到鳙鱼653bp、 草鱼666bp的部分cDNA 序列和892bp的鲢鱼GPX cDNA 全序列和长度为750bp 的5’侧翼区序列。该序列包括一个576bp的开放阅读框 （编码191个氨基酸）， 25bp的5’UTR 和291 bp 的3’UTR 。由该序列推断的多肽分子量为21.59kDa，其 中第四十位氨基酸为TGA编码的硒代半胱氨酸。序列比对分析结果显示，鲢鱼、 鳙鱼、草鱼与斑马鱼(Danio rerio)(同属鲤科)、条石鲷(Oplegnathus fasciatus)、(鲈形目)等鱼类GPX 氨基酸序列同源性很高，为75%-93%。鲢鱼、 鳙鱼、草鱼GPX与其它生物GPX 的系统进化分析表明所克隆得到的鲢鱼、鳙鱼、 草鱼的GPX应为GPX2型。不同的是，哺乳动物中GPX2只在胃、肠中表达，鲢鱼 GPX 在肝脏、脂肪、肠、肌肉和脑中都有广泛的表达。以 β-肌动蛋白为外参照， 比较鲢鱼、鳙鱼、草鱼肝脏GPX基因的表达水平发现，鲢鱼、鳙鱼肝脏GPX 的表 达量远高于草鱼肝脏GPX 的表达量，这与鲢鱼、鳙鱼大量摄入微囊藻毒素在鱼体 内引发产生过量的脂过氧化物相适应。 关键词 谷胱甘肽过氧化物酶；cDNA 序列；克隆；组织表达；鲢鱼；鳙鱼；草鱼 I Studies on Molecular Cloning and Tissue Expression of Glutathione Peroxide of Silver Carp hypophthalmichys molitrix Bighead Carp Aristichthys nobilis and Grass Carp Ctenopharyngodon idella Abstract Glutathione peroxidase (GPX) is a generic name for a family of multiple isozymes. In general, the members in the family can be divided into two sorts. One sort of the isozymes have selenium-dependent glutathione peroxidase activity and contain selenocysteine (SeC) encoded by a TGA codon, while the other sort have no selenocysteine. In this study, glutathione peroxidase (GPX) cDNAs were cloned from the liver of phytoplanktivorous freshwater fish, including silver carp Hypophthalmichthys molitrix and bighead carp Aristichthys nobilis , and herbivorious fish, grass carp Ctenopharyngodon idella using RT-PCR. Sequence a