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硅胶填料的孔径和粒径大小对一种小分子 白质——胰岛素分离的影响 应用报告 生物制药 作者 摘要 Rongjie Fu 本文采用不同孔径和粒径的硅胶填料色谱柱对胰岛素这种小分子蛋白质进行分离。对不 安捷伦科技有限公司（上海） 同孔径（包括80 Å、95 Å、120 Å、170 Å、300 Å）和粒径（包括 1.8 µm、2.7 µm、 英伦路412 号 3.5 µm、5 µm）填料色谱柱的柱效和分辨率进行了对比。 上海200131 对比结果显示，胰岛素分析采用较大孔径填料的色谱柱可获得更高的柱效。填料孔径大于 中国 100 Å 的色谱柱即可以使胰岛素达到高效分离，而采用300 Å 的大孔径色谱柱对于该中等 分子量分子的分析就没有必要。采用小粒径填料色谱柱分析胰岛素也可获得较高柱效。这 Maureen Joseph Agilent Technologies, Inc. 一点通过改变粒径大小（5 µm3.5 µm1.8 µm）进行分析得到证实。 2850 Centerville Road Agilent Poroshell 120 色谱柱使用了120 Å 孔径，2.7 µm 粒径的表面多孔颗粒填料，使它 Wilmington, DE 19808 USA 成为胰岛素分析的最佳选择。 前言 材料与方法 硅胶填料的粒径和孔径是反相 HPLC 分析中色谱柱选择的重要参 HPLC 条件 数。3 µm 以下（包括亚2 µm）的小粒径填料色谱柱因其可实现 色谱柱 所有色谱柱均为 C18 色谱柱，满足药典规定的十八烷基 高柱效和快速分离而得到广泛应用。另外，硅胶颗粒的孔径在选 （ ）化学键合多孔硅胶键合相的要求 C18 择色谱柱时也应充分考虑。对于分子量小于 5000 Da 的分子通常 流速 1.0 mL/min 选择小孔径（60-120 Å）填料的色谱柱，分析低分子量蛋白质 进样量 20 µL （ ）时通常选择 孔径填料的色谱柱，而高分 柱温 40 °C 5-50 KDa 200-300 Å 检测波长 214 nm 子量蛋白质和疫苗则需要采用更大孔径（1000-4000 Å）填料的色 流动相 74% A: 26% B ， 谱柱。 A: 0.2 mol/L 硫酸盐缓冲液（将 28.4 g 无水硫酸钠溶于 虽然分析小分子蛋白质，如分子量约为5800 Da 的胰岛素，可采 1000 mL 水中，加入 2.7 mL 磷酸，并用乙醇胺调节 pH